噻唑藍(lán)，英文名為Thiazolyl Blue，英文縮寫為MTT，常溫常壓下為淡黃色結(jié)晶粉末，在醇類有機(jī)溶劑中有較好的溶解性。噻唑藍(lán)是一種細(xì)胞可滲透且?guī)д姷谋壬珓哂幸欢ǖ奈鼭裥院凸饷舾行?，被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞中的還原代謝以及測(cè)量細(xì)胞增殖，細(xì)胞毒性和凋亡。需要說明的是該物質(zhì)在活細(xì)胞中會(huì)從黃色還原為紫色的甲臜。

圖1 噻唑藍(lán)的商品圖

性質(zhì)

噻唑藍(lán)是一種含有多個(gè)富電子雜環(huán)單元的化合物，具有很強(qiáng)的電子親和性和氧化還原活性。這種化合物的化學(xué)穩(wěn)定性較差，主要是因?yàn)槠浞肿咏Y(jié)構(gòu)中的富電子雜環(huán)單元容易發(fā)生氧化和其他反應(yīng)。長(zhǎng)時(shí)間將噻唑藍(lán)置于空氣環(huán)境中，容易吸潮并導(dǎo)致其變質(zhì)。吸濕會(huì)引起噻唑藍(lán)分子結(jié)構(gòu)中的水解反應(yīng)，導(dǎo)致其性質(zhì)和性能發(fā)生變化。因此，為了保持它的化學(xué)穩(wěn)定性和性能，一般要求將該物質(zhì)存放在低溫環(huán)境中可以減緩其分子反應(yīng)的速度。

生物應(yīng)用

噻唑藍(lán)常用于基于MTT檢測(cè)方法的細(xì)胞活力、細(xì)胞增殖或細(xì)胞毒性檢測(cè)，因?yàn)猷邕蛩{(lán)具有正電荷，它可以穿過細(xì)胞膜并被線粒體還原形成紫色甲臜染料。該物質(zhì)還可用于脫氫酶的檢測(cè)，生化研究中酶活力的測(cè)定。。此外，它在測(cè)定NADH2、NADPH2和心肌黃酶(Diaphorase)的生物活性中也有一定的應(yīng)用。噻唑藍(lán)的檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO )能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶標(biāo)儀在490nm或570nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶溶解所致的吸光度值與細(xì)胞數(shù)量成正比。根據(jù)測(cè)得的吸光度值(OD值)，來判斷活細(xì)胞數(shù)量，OD值越大，細(xì)胞數(shù)量越多或活性越強(qiáng)(如果是測(cè)藥物毒性，則表示藥物毒性越小)。經(jīng)驗(yàn)心得，MTT實(shí)驗(yàn)最終吸光度應(yīng)當(dāng)落于0.8~1.2左右，太小檢測(cè)誤差占的比例較多，太大吸收值可能已經(jīng)超出線性范圍。[1]

參考文獻(xiàn)

[1] 陳哲生,孫明杰.噻唑藍(lán)比色法用來研究人淋巴細(xì)胞和小鼠巨噬. [J].現(xiàn)代免疫學(xué), 1992(5):269-271.