背景^[1-3]

異戊烯焦磷酸1抗體是一類(lèi)可以特異性結(jié)合異戊烯焦磷酸1的多克隆抗體，主要用于異戊烯焦磷酸1的體外免疫學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。

焦磷酸酶是作用于雙磷酸鍵上的酸酐水解酶。焦磷酸酶是一種催化一分子焦磷酸鹽轉(zhuǎn)化為兩分子磷酸鹽離子的酶。這是一個(gè)高放能的反應(yīng)，因此此反應(yīng)可偶聯(lián)到一些熱力學(xué)上不利的轉(zhuǎn)化，以便驅(qū)動(dòng)這些轉(zhuǎn)化進(jìn)行到完全。

異戊烯焦磷酸1免疫組化

異戊烯二磷酸是所有類(lèi)萜化合物生物合成的前體。一般認(rèn)為乙酰輔酶A是合成途徑的起始材料，通過(guò)一系列酶促反應(yīng)而形成。

生物體內(nèi)的乙酰輔酶A合成酶可以將醋酸鹽轉(zhuǎn)變?yōu)橐阴］o酶A，同時(shí)糖酵解、脂肪酸代謝也能形成乙酰輔酶A。在乙?；D(zhuǎn)移酶作用下，2個(gè)分子乙酰輔酶A縮合形成乙酰乙酰輔酶，在羥基甲基戊二酰輔酶A合成酶作用下，乙酰乙酰輔酶A與乙酰輔酶A進(jìn)一步縮合形成β羥基一β甲基戊二酰輔酶A。

它在羥甲基戊二酰輔酶A還原酶作用通過(guò)還原反應(yīng)產(chǎn)生3，5一二羥一3一甲基戊酸(MVA)，接著，在有ATP參與下，通過(guò)甲羥戊酸激酶作用，MVA轉(zhuǎn)變?yōu)榧琢u戊酸磷酸(MVAP)，再通過(guò)磷酸甲羥戊酸激酶作用，MVAP進(jìn)一步磷酸化為甲羥戊酸焦磷酸(MVAPP)。在A(yíng)TP存在下，經(jīng)二磷酸甲羥戊酸脫羧酶作用，通過(guò)脫羧，MVAPP轉(zhuǎn)變?yōu)樯飳W(xué)上重要的C；化合物異戊烯焦磷酸(IPP)。

應(yīng)用^[4][5]

用于靈芝異戊二烯焦磷酸異構(gòu)酶基因的克隆及其表達(dá)特性的研究

異戊二烯焦磷酸異構(gòu)酶處于甲羥戊酸途徑中的末端,催化無(wú)活性的異戊烯焦磷酸轉(zhuǎn)化為有活性的親核型異構(gòu)體二甲基烯丙基焦磷酸,進(jìn)而激活五碳化合物鏈的延伸反應(yīng),是萜類(lèi)化合物合成過(guò)程中的一個(gè)重要的酶；而且它可能通過(guò)調(diào)節(jié)底物異戊烯焦磷酸和二甲基烯丙基焦磷酸的比例來(lái)調(diào)節(jié)相關(guān)代謝終產(chǎn)物的流向。

通過(guò)已報(bào)道過(guò)的其他物種的IDI1氨基酸序列,設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物,PCR擴(kuò)增得到該基因599 bp的特異片段；然后基于獲得的特異片段序列,設(shè)計(jì)特異性5’-SEFA引物,以靈芝菌絲體DNA為模板擴(kuò)增該基因的5’端和啟動(dòng)子區(qū)；通過(guò)3’-RACE的方法,以反轉(zhuǎn)錄cDNA為模板,擴(kuò)增得到該基因的3端和3’UTR。對(duì)得到的序列進(jìn)行拼接、比對(duì)分析后,設(shè)計(jì)引物,分別以靈芝的基因組DNA和cDNA為模板擴(kuò)增得到異戊二烯焦磷酸異構(gòu)酶基因（idil）的基因組序列和cDNA全長(zhǎng)序列?；蚪M全長(zhǎng)為985 bp,cDNA全長(zhǎng)為759 bp,其編碼一個(gè)252個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)。

對(duì)靈芝異戊二烯焦磷酸異構(gòu)酶基因的基因組序列和cDNA序列的對(duì)比分析表明,該基因由3個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子構(gòu)成,它們的長(zhǎng)度分別為59 bp（intronl）、167 bp（intron2）。將該基因轉(zhuǎn)入具有合成β-胡蘿卜素生物合成途徑的大腸桿菌TOP10 F’,發(fā)現(xiàn)該基因的導(dǎo)入使原菌株中的β-胡蘿卜素生物積累顯著增加,通過(guò)這種方法進(jìn)一步證明了我們得到的基因是有功能的。

通過(guò)軟件分析,預(yù)測(cè)靈芝IDI1蛋白質(zhì)分子量為28.70777kD,等電點(diǎn)為5.36。利用Plant care網(wǎng)站對(duì)得到靈芝idil基因及1202bp啟動(dòng)子序列預(yù)測(cè)分析,結(jié)果顯示：靈芝idil基因的啟動(dòng)子區(qū)域含有17個(gè)CAAT box、1個(gè)推定的TATA box等典型的真核生物啟動(dòng)子元件。

另外,還含2個(gè)Spl元件、1個(gè)ATC-motif、1個(gè)Box 4（光調(diào)控順時(shí)作用元件）、1個(gè)LTR元件（低溫響應(yīng)元件）、1個(gè)Box-W1（真菌激發(fā)子響應(yīng)元件）、2個(gè)auxin-responsiveelement（茁長(zhǎng)素響應(yīng)元件）、1個(gè)MYBHvl結(jié)合位點(diǎn)、4個(gè)CGTCA-motif、2個(gè)TGACG-motif（茉莉酸甲酯響應(yīng)元件）、2個(gè)MBS（與干旱誘導(dǎo)有關(guān)的MYB結(jié)合位點(diǎn)）等。

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