介紹
N-芴甲氧羰基-O-芐基-L-磷酸酪氨酸（Fmoc-Tyr-OTBDMS，TBDMS 為叔丁基二甲基硅基）是一種在固相肽合成中用于引入O-磷酸酪氨酸殘基的重要衍生物，在蛋白質中酪氨酸殘基的磷酸化修飾有所應用。
N-芴甲氧羰基-O-芐基-L-磷酸酪氨酸
合成方法
首先利用二芐基N,N-二乙基磷酰胺進行亞磷酸三酯磷酸化反應，接著用叔丁基過氧化氫氧化生成的二芐基亞磷酸三酯中間體，最后經(jīng)乙酸水溶液處理去除硅基酯，最終以64%的收率得到目標產(chǎn)物N-芴甲氧羰基-O-芐基-L-磷酸酪氨酸。其結構經(jīng)13C NMR光譜、元素分析和正離子FAB-質譜（m/z 686 M+Na+）確認，純度通過反相HPLC測定。
在固相肽合成中的應用
N-芴甲氧羰基-O-芐基-L-磷酸酪氨酸可以用于合成包含病毒蛋白p85gag-fes序列的七肽以及表皮生長因子受體激酶的主要自磷酸化位點的十三肽。采用Fmoc-聚酰胺固相肽合成方法的連續(xù)流變體。肽鍵形成反應使用Nα-Fmoc-氨基酸（3 當量）、苯并三唑-1-氧基三（二甲基氨基）六氟磷酸磷（BOP）、1-羥基苯并三唑（HOBt）和N-甲基嗎啉（3:3:4.5 當量）等為原料，?；瘯r間為25分鐘，天冬酰胺以其鄰硝基苯酯形式（3 當量）在HOBt催化下引入。Nα-Fmoc脫保護使用20%哌啶的DMF溶液處理10分鐘。
穩(wěn)定性問題及解決策略
由N-芴甲氧羰基-O-芐基-L-磷酸酪氨酸合成的多肽化合物（七肽或十三肽）中的酪氨酸-磷酸酯鍵對TFA不完全穩(wěn)定，用95% TFA-5%硫代苯甲醚處理肽樹脂時，會產(chǎn)生約9%的脫磷酸化雜質；用1 mol/dm3 TMSBr-PhSMe-TFA處理時也有類似情況。同時，Tyr(PO)3Me2在Fmoc固相合成中會被強親核試劑哌啶去除一個甲基保護基，存在發(fā)生副反應的可能。而對于Tyr(PO)3Bzl2（20% 哌啶的DMF溶液）會使其快速單脫芐基，不過使用非親核性堿1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯，在濃度為1 mol/dm3（15.4%）的DMF溶液中，脫保護速度較慢t1/2為14小時），濃度為2%的DBU-DMF溶液能快速進行Nα-Fmoc脫保護且無明顯副反應，因此1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯是該衍生物在固相肽合成中Fmoc脫保護的理想試劑[1]。
參考文獻
[1]Miyajima Y ,Ochiai K ,Fujii S .Design, Synthesis, and Evaluation ofB -(Trifluoromethyl)phenyl Phosphine–Borane Derivatives as Novel Progesterone Receptor Antagonists[J].Molecules,2024,29(7):