背景[1-3]
G蛋白偶聯(lián)受體ARHGEF18抗體是一類可以特異性結(jié)合G蛋白偶聯(lián)受體ARHGEF18的多克隆抗體，主要用于G蛋白偶聯(lián)受體ARHGEF18的體外檢測。
G蛋白偶聯(lián)受體（G Protein-Coupled Receptors，GPCRs）是一大類膜蛋白受體的統(tǒng)稱。這類受體的共同點是其立體結(jié)構(gòu)中都有七個跨膜α螺旋，且其肽鏈的C端和連接（從肽鏈N端數(shù)起）第5和第6個跨膜螺旋的胞內(nèi)環(huán)（第三個胞內(nèi)環(huán)）上都有G蛋白（鳥苷酸結(jié)合蛋白）的結(jié)合位點。目前為止，研究顯示G蛋白偶聯(lián)受體只見于真核生物之中，而且參與了很多細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程。在這些過程中，G蛋白偶聯(lián)受體能結(jié)合細(xì)胞周圍環(huán)境中的化學(xué)物質(zhì)并激活細(xì)胞內(nèi)的一系列信號通路，最終引起細(xì)胞狀態(tài)的改變。已知的與G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合的配體包括氣味，費洛蒙，激素，神經(jīng)遞質(zhì)，趨化因子等等。這些受體可以是小分子的糖類，脂質(zhì)，多肽，也可以是蛋白質(zhì)等生物大分子。
G蛋白偶聯(lián)受體機構(gòu)圖
G蛋白偶聯(lián)受體的下游信號通路有多種。與配體結(jié)合的G蛋白耦聯(lián)受體會發(fā)生構(gòu)象變化，從而表現(xiàn)出鳥苷酸交換因子（GEF）的特性，通過以三磷酸鳥苷（GTP）交換G蛋白上本來結(jié)合著的二磷酸鳥苷（GDP）使G蛋白的α亞基與β、γ亞基分離。這一過程使得G蛋白（特別地，指其與GTP結(jié)合著的α亞基）變?yōu)榧せ顮顟B(tài)，并參與下一步的信號傳遞過程。具體的傳遞通路取決于α亞基的種類（Gαs,Gαi/o,Gαq/11,Gα12/13），其中兩個主要的通路分別涉及第二信使環(huán)腺苷酸（cAMP）和磷脂酰肌醇。
應(yīng)用[4][5]
用于基于單細(xì)胞RNA-seq的小鼠腎小球固有細(xì)胞必需基因的分析研究
通過FluidigmC1單細(xì)胞捕獲和cDNA制備平臺,獲得小鼠腎小球單細(xì)胞cDNA樣品,并對其中14個系膜細(xì)胞和20個足細(xì)胞cDNA樣品進行了測序分析。對20個足細(xì)胞的測序結(jié)果進行分析。足細(xì)胞的單細(xì)胞測序分析結(jié)果同樣揭示了任意兩個足細(xì)胞間基因表達的巨大差異,相關(guān)系數(shù)為0.27±0.035（MEAN±SD）。
總共發(fā)現(xiàn)335個20個足細(xì)胞共同表達的基因（RPKM>0.5）,即足細(xì)胞必需基因。在這335個基因中,有239個同樣在腎小球系膜細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中表達,GO分析發(fā)現(xiàn)它們主要參與能量代謝、蛋白質(zhì)合成等生物學(xué)過程,因而是管家基因。
此外,92個基因主要在足細(xì)胞中表達;為驗證它們是足細(xì)胞特異的必需基因,我們通過多種方法對其進行分析,包括生物信息學(xué)分析、在人類足細(xì)胞中表達保守性的檢驗、與腎臟損傷/疾病的相關(guān)性分析、以及已知足細(xì)胞必需基因富集分析等,所有結(jié)果都支持這92個基因是足細(xì)胞特異的必需基因這一推測。
為了從功能上驗證這些基因?qū)ψ慵?xì)胞的重要性,在體外培養(yǎng)的足細(xì)胞中利用siRNA敲低了部分基因,并檢測在足細(xì)胞結(jié)構(gòu)中起著關(guān)鍵作用的細(xì)胞骨架,結(jié)果發(fā)現(xiàn)37個基因敲低中有30個造成了足細(xì)胞骨架的損傷。
這些基因包括FGFR1、IFT80、AOX1、MYOM2、AIF1L、ANXA4、HAUS8、RAB3B、LPIN2、GOLIM4、CERS6、CYB5R4、ARHGEF18、ARPC1A、GPC1、MPP5、SRGAP1、ZNF277、ITGB5、ILDR2、NSF、TSC22D1、DNAJC11、ITGAV、SEPT10、MOCS2、FNBP1L、CRYAB、MTSS1以及TMOD3。
總之,通過對20個足細(xì)胞的單細(xì)胞測序分析,我們不僅發(fā)現(xiàn)大量新的足細(xì)胞特異的必需基因,并且發(fā)現(xiàn)它們主要參與足細(xì)胞骨架的形成和穩(wěn)定,與足細(xì)胞特有的結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能相一致。
參考文獻
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