背景及概述^[1]

2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2，4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽，簡稱WST-8，是細胞活性檢測劑CCK-8試劑盒中的一種主要成分。CCK-8試劑盒是日本Dojindo研究所開發(fā)的用于檢測細胞增殖、細胞毒性的試劑盒。該試劑盒使用方便、靈敏度高、重復(fù)性好、無放射性。但該試劑盒價格昂貴，其主要成分WST-8市售價格高。

制備^[1]

1）化合物3的制備

取化合物2(4.94g，0.0322mol)于500ml三口瓶中，加入150ml甲醇，加熱攪拌至回流溶解。冷卻到50℃，緩慢加入化合物1(10.0g，0.0322mol)。恒溫50℃，繼續(xù)攪拌2h。減壓抽濾，少量甲醇洗滌，得化合物3(11.065g，0.0249mol)，收率77.4%。

¹H-NMR(400MHz，D₂O)δH：6.83(d，2H，J=9Hz)，7.65(dd，1H，J=8Hz，1Hz)，7.81(d，2H，J=9Hz)，7.93(d，1H，J=8Hz)，8.03(d，1H，J=1Hz)，8.31(s，1H)。

2）4-硝基-2-甲氧基重氮鹽的制備

取2-甲氧基-4-硝基苯胺(3.7g，0.0220mol)于50ml單口瓶，-10~0℃冰浴，加入6.67ml濃鹽酸用水稀釋的鹽酸溶液15ml。攪拌5min。然后緩慢滴加(1.64g，0.0237mol)亞硝酸鈉溶于10ml水得到的溶液。加畢，繼續(xù)攪拌30min。即得重氮鹽溶液。備用（即制即用）。

3）化合物4的制備

取化合物3(10.0g，0.0224mol)于500ml三口瓶，加200ml甲醇，攪拌5min。然后向其中邊加NaOH(3.6g，0.09mol)水溶液15ml邊加上述重氮鹽溶液。加畢，-10~5℃冰浴攪拌2h，室溫攪拌2h，此時反應(yīng)體系為墨綠色。用4ml濃鹽酸用水稀釋的鹽酸溶液8ml調(diào)至深紅色。蒸干溶劑。加入200ml石油醚超聲，減壓抽濾，得化合物4(12.054g，0.0193mol)，紅棕色固體，收率86.2%。

¹H-NMR(400MHz，D₂O)δH：3.65(s，3H)，7.42(t，4H)，7.50(d，1H，J=2Hz)，7.69(d，1H，J=9Hz)，8.03(m，3H)，8.33(d，1H，J=1Hz)。

4）2-(2-甲氧基-4-硝基苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2，4-二磺基苯)-2H-四氮唑單鈉鹽的制備

取化合物4(12.054g，0.0193mol)于500ml單口瓶，加120ml甲醇，呈深紅棕色。攪拌5min。加入NBS(5.0g，0.0281mol)的丙酮溶液100ml。攪拌約1h，顏色變淺，繼續(xù)攪拌直至反應(yīng)體系呈黃色。減壓抽濾，得黃綠色固體。重結(jié)晶（乙醇/水=2），真空干燥，得化合物2-(2-甲氧基-4-硝基苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2，4-二磺基苯)-2H-四氮唑單鈉鹽(6.211g，0.0099mol)，淺黃色固體粉末，收率51.6%。

¹H-NMR(400MHz，D₂O)δH：3.54(s，3H)，7.95(m，6H)，8.13(d，1H，J=8Hz)，8.34(m，3H)；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δH：3.74(s，3H)，7.86(m，2H)，8.06(d，1H，J=2Hz)，8.14(d，2H，J=9Hz)，8.24(dd，1H，J=8Hz，2Hz)，8.30(d，1H，J=1Hz)，8.54(d，3H，J=9Hz)。

主要參考資料

[1]CN201210358733.3 2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2，4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽的合成方法