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NFKB誘導(dǎo)激酶抗體的應(yīng)用

2021/2/25 11:31:32

背景[1-3]

NFKB誘導(dǎo)激酶抗體是可以特異性結(jié)合NFKB誘導(dǎo)激酶的一類多克隆抗體,主要用于體外檢測NFKB誘導(dǎo)激酶的免疫學(xué)實驗。

細胞增殖在從發(fā)育到修復(fù)損傷組織等許多生理過程中起重要作用。多種機制參與細胞增殖的嚴(yán)謹調(diào)節(jié)。例如,原癌基因的活性可通過腫瘤抑制因子的作用來平衡;DNA損傷與修復(fù)的存在降低了基因突變和細胞惡性轉(zhuǎn)化的風(fēng)險;免疫系統(tǒng)可以識別并清除癌癥細胞。穩(wěn)態(tài)調(diào)控機制的持續(xù)性被破壞必然導(dǎo)致細胞增殖過度從而形成癌癥。

NFKB誘導(dǎo)激酶免疫組化圖

NFkB1和NFkB2是轉(zhuǎn)錄因子Rel/NFkB家族的成員,此家族還包括RelA、c-Rel和RelB。Rel/NFkB家族調(diào)控了參與免疫、凋亡和致癌過程的基因的表達。NFkB主要存在于細胞質(zhì)中,并與抑制性的IkB蛋白形成復(fù)合物,當(dāng)IkB磷酸化之后,NFkB被釋放,并轉(zhuǎn)位到細胞核。NFkB1(105 kDa)和NFkB2(100 kDa)在合成時均為前體分子,可被蛋白水解為50和52 kDa的活性亞基。

NFkB似乎在凋亡和細胞存活上有著矛盾的功能。NFkB通過抑制p53依賴的凋亡和上調(diào)Bcl-2家族的抗凋亡成員和caspase抑制劑(如XIAP和FLIP),介導(dǎo)了許多信號的存活反應(yīng)。相反,NFkB也被DNA損傷中的凋亡刺激所激活,介導(dǎo)了促凋亡基因(如TRAIL R2/DR5、Fas和Fas配體)的上調(diào)。

應(yīng)用[4][5]

用于p55PIK/NFκB通路在炎癥調(diào)控中的作用及機制研究

磷脂酰肌醇-3-激酶蛋白家族(PI3Ks)蛋白同免疫反應(yīng)密切相關(guān),其調(diào)節(jié)亞單位和催化亞單位的表達缺失或應(yīng)用相應(yīng)的PI3Ks抑制劑能夠?qū)γ庖叻磻?yīng)產(chǎn)生顯著影響。其中,IA類PI3Ks調(diào)節(jié)亞單位能夠通過其i-SH2結(jié)構(gòu)域同相應(yīng)的催化亞單位形成二聚體結(jié)構(gòu),進而調(diào)控催化亞單位的激酶活性。

目前關(guān)于IA類PI3Ks亞單位對免疫反應(yīng)尤其是炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用存在較多爭議,本論文旨在明確IA類PI3Ks調(diào)節(jié)亞單位p55PIK對炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用,初步探討蛋白p55PIK對炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用的機制。

方法:擴增并純化表達蛋白p55PIK的腺病毒載體,在HaCat細胞內(nèi)高表達蛋白p55PIK;通過在PMA誘導(dǎo)后的THP1細胞內(nèi)轉(zhuǎn)染蛋白p55PIK特異性的siRNA,降低蛋白p55PIK的表達。通過單獨影響蛋白p55PIK的表達或者再次給予LPS(脂多糖)刺激,通過Q-PCR檢測相應(yīng)促炎細胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6的轉(zhuǎn)錄水平的變化;通過ELISA試驗檢測相應(yīng)促炎細胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6的蛋白水平的變化;通過VWestern Blot檢測]VFκB信號通路,PI3K/AKT通路,IKK信號通路以及MAPK信號通路的激活情況。

結(jié)果:成功擴增并純化表達蛋白p55PIK的腺病毒載體,成功篩選出蛋白p55PIK特異性的siRNA。在HaCat細胞內(nèi)單獨高表達p55PIK或者再次給予LPS刺激后均能夠顯著促進炎癥因子轉(zhuǎn)錄和翻譯(P<0.05),能夠激活NFκB信號通路和PI3K/AKT通路,但對IKK信號通路以及MAPK信號通路無明顯影響;在THP1細胞內(nèi)單獨低表達p55PIK或者再次給予LPS刺激后均能夠顯著抑制炎癥因子轉(zhuǎn)錄和翻譯(P<0.05),能夠抑制NFκB信號通路和PI3K/AKT通路的激活,但對IKK信號通路以及MAPK信號通路無明顯影響。

參考文獻

[1]Induction of IFN-alphabeta enables Listeria monocytogenes to suppress macrophage activation by IFN-gamma.Rayamajhi,M,J Humann,K.Penheiter,K.Andreasen,L.L.Lenz.The Journal of Experimental Medicine.2010

[2]CD19 is essential for B cell activation by promoting B cell receptor-antigen microcluster formation in response to membrane-bound ligand.Depoil D,Fleire S,Treanor BL,et al.Nature Immunology.2008

[3]Determinant role of Phosphoinositide 3-kinase y in MCP-1-mediated amplification of PDGF-induced aortic smooth muscle cell migration.Fougerat A,Smirnova N,Gayral S,et al.British Journal of Pharmacology.2012

[4]Central role for G protein-coupled phosphoinositide 3-kinase gamma in inflammation.Hirsch E,Katanaev V L,Garlanda C,et al.Science.2000

[5]劉韋成.p55PIK/NFκB通路在炎癥調(diào)控中的作用及機制研究[D].華中科技大學(xué),2012.

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