背景[1][2]
單克隆抗體技術(shù)起源于Kohler等創(chuàng)建的體外鼠源雜交瘤技術(shù)。經(jīng)多年研究，鼠單抗已從單純的生物實(shí)驗(yàn)室科研及臨床診斷發(fā)展到治療性抗體藥物。但鼠單抗的主要缺陷是小鼠免疫系統(tǒng)不能識別某些免疫原，尤其是鼠源性的免疫原，而且鼠單抗的親和性不如兔來源抗體的親和性高。然而由于沒有發(fā)現(xiàn)兔源性的漿細(xì)胞瘤及病毒體外轉(zhuǎn)染兔B細(xì)胞的技術(shù)困難，直到1995年在c-myc/v-abl轉(zhuǎn)基因兔身上成功地獲得了兔漿細(xì)胞瘤細(xì)胞系，得到了穩(wěn)定的兔-兔雜交瘤，才使兔單克隆抗體技術(shù)有了突破性進(jìn)展。
近年兔單克隆抗體技術(shù)日臻完善，目前商品化的兔單抗已達(dá)數(shù)千種。Caspase 為天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶，是一類進(jìn)化上高度保守的半胱氨酸蛋白酶家族。Caspase 依賴的凋亡途徑是細(xì)胞程序性死亡的一種重要方式，其中Caspase-2 是最保守的Caspase家族成員之一。文獻(xiàn)報(bào)道Caspase-2 位于Caspase-3 的上游，在凋亡的發(fā)生中其先于Caspase-3 被激活。Caspase-2 為凋亡啟動因子并促使細(xì)胞發(fā)生凋亡，當(dāng)Caspase-2 的表達(dá)下調(diào)可抑制細(xì)胞凋亡。Caspase-2 在凋亡中發(fā)揮復(fù)雜而獨(dú)特的作用。
Caspase-2m RNA 存在兩種剪接變異體，分別編碼Caspase-2L 和Caspase-2s 兩種蛋白，前者分子量大，后者分子量小，它們對凋亡的作用正好相反，Caspase-2L 過量表達(dá)可促進(jìn)凋亡，而Caspase-2S 過量表達(dá)則抑制凋亡。其中Caspase-2L 在大多數(shù)組織中表達(dá)占優(yōu)勢。
這兩種m RN A 是由于對外顯子9 的不同剪切方式而形成的，Caspase-2L 含有外顯子9，而Caspase-2S 不含。這兩種形式的Caspase-2在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的平衡對于細(xì)胞是否存活至關(guān)重要。Caspase-2兔單克隆抗體主要用于分子印跡分析，適用于人、大鼠及小鼠。Caspase-2兔單克隆抗體100 µl 濃度為 2.638 mg/ml40 µl 濃度為 2.638 mg/ml批次濃度范圍 10 µl 濃度為 2.383 - 2.638 mg/ml。
應(yīng)用
1. 在生物標(biāo)記物開發(fā)中的應(yīng)用
兔單克隆抗體包括Caspase-2兔單克隆抗體廣泛用于生命科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域，尤其在免疫組織化學(xué)以及檢測蛋白的轉(zhuǎn)譯后修飾方面具有獨(dú)特優(yōu)勢。至今已有100多種兔單克隆抗體開發(fā)用于癌癥的IHC臨床診斷與研究，其中最具代表性的就是Her2和c-Kit的IHC診斷試劑盒。在蛋白修飾研究領(lǐng)域，如蛋白的磷酸化，在與疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)信號通路中起到了至關(guān)重要的作用，使用磷酸化蛋白的兔單克隆抗體可以非常清楚地顯示蛋白的磷酸化程度。目前已有200多種磷酸化特異性的兔單克隆抗體面世。
2. 在治療抗體藥物開發(fā)中的應(yīng)用
臨床使用的大多數(shù)治療用抗體均需經(jīng)體外親和力成熟這一步驟，以提高抗體的親和力。這一過程常需8至12個(gè)月，最終親和力在納摩爾級(10-9 mol/L)。兔單抗不需使用體外親和力成熟，就能達(dá)到10-11至10-13 mol/L。這種高親和力不僅減少抗體的臨床使用量，還能減少由于使用大量抗體帶來的副作用。但這種高親和力的優(yōu)勢還需在動物和臨床試驗(yàn)中進(jìn)一步證實(shí)。
另外，與鼠單抗的人源化相比，兔單克隆抗體的人源化更容易。因?yàn)椋脝慰寺】贵w主要由一種重鏈及輕鏈基因構(gòu)成，通過分析大量的兔單克隆抗體序列發(fā)現(xiàn)，兔與人的抗體同源性更高，約60%～76%，而小鼠與人的抗體同源性略低，為57%～72%，說明用兔單克隆抗體開發(fā)藥物前景更廣闊。
主要參考資料
[1] 李婷婷，崔慧斐. 兔單克隆抗體的發(fā)展及應(yīng)用前景[J]. 食品與藥品，2012，14(9)： 373-376.
[2] 劉天會, 陳瑞, 孫志賢. caspase-2: 一種特殊的半胱天冬酶[J]. 國外醫(yī)學(xué): 遺傳學(xué)分冊, 2004, 27(5): 268-270.