谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）試劑盒說(shuō)明書

微量法 100T/96S

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

GSH-Px 是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)中催化還原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。GSH-Px 不僅能

夠特異地催化還原型谷胱甘肽與 ROS 反應(yīng)，生成氧化型谷胱甘肽 GSSG，從而保護(hù)生物膜免受 ROS 的損

害，維持細(xì)胞的正常功能；而且具有保護(hù)肝臟、提高機(jī)體免疫力、拮抗有害金屬離子對(duì)機(jī)體的傷害和增加

機(jī)體抗輻射等能力。

測(cè)定原理：

GSH-Px 催化有機(jī)過(guò)氧化物氧化 GSH，產(chǎn)生 GSSG；谷胱甘肽還原酶（GR）催化 NADPH 還原 GSSG，

再生 GSH，同時(shí) NADPH 氧化生成 NADP+；NADPH 在 340 nm 有特征吸收峰，而 NADP+沒有；通過(guò)測(cè)定

340 nm 光吸收減少速率來(lái)計(jì)算 GSH-Px 活性。

自備儀器和用品：

低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、酶標(biāo)儀、96 孔板、和蒸餾水。

粗酶液提?。?/p>

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑

一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測(cè)。

2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加

入 1ml 試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 8000g，

4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 血清等液體：直接測(cè)定。

GSH-Px 測(cè)定操作：

1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 340 nm。

2. 混合試劑在 25℃或者 37℃（哺乳動(dòng)物）水浴中預(yù)熱 30min。

3. 混合試劑配制：臨用前，取試劑二一瓶，加入試劑一 10 mL，充分震蕩溶解后，取少量、混合液于一

瓶試劑三中，充分混勻后再轉(zhuǎn)移回試劑二中，混勻待用。（當(dāng)天用完）

4. 試劑四的稀釋：吸取 21.5μl 試劑四，加入 5ml 蒸餾水充分混勻，臨用前配制，配制好的試劑當(dāng)天使用。

5. 測(cè)定管：依次在 96 孔板中加入 20μl 上清液、160μl 預(yù)熱的混合試劑、20μl 稀釋后的試劑四，迅速混勻

后于 340nm 處測(cè)定第 30 s 和第 210s 的吸光值，分別記為 A1 和 A2?！鰽 測(cè)定管= A1﹣A2。