還原型谷胱甘肽(reduced glutathione, GSH)試劑盒說明書
微量法 100T/96S
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
GSH 是細(xì)胞內(nèi)最主要的抗氧化巰基物質(zhì),在抗氧化、蛋白質(zhì)巰基保護(hù)和氨基酸跨膜運(yùn)輸?shù)戎芯哂兄匾?作用。還原型與氧化型比值(GSH/GSSG)是細(xì)胞氧化還原狀態(tài)的主要?jiǎng)討B(tài)指標(biāo)。因此,測(cè)定細(xì)胞內(nèi) GSH 和 GSSG 含量以及 GSH/GSSG 比值,能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài)。
測(cè)定原理:
DTNB 與 GSH 反應(yīng)生成復(fù)合物,在 412nm 處有特征吸收峰;其吸光度與 GSH 含量成正比。
自備儀器和用品:
低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(ml)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml 試劑 一)進(jìn)行冰浴勻漿。8000xg,4℃離心 10min,取上清置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(10 4個(gè)):試劑一體積(ml)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)胞加 入 1ml 試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時(shí)間 3min);然后 8000xg, 4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測(cè)。 3. 血清等液體:直接測(cè)定。
GSH 測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 412 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于 25℃(一般物種)或者 37℃(哺乳動(dòng)物)水浴中保溫 30min。
3. 空白管:取微量玻璃比色皿或 96 孔板,依次加入 20μl 蒸餾水,140μl 試劑二,40μl 試劑三,混勻靜置 2min 后測(cè)定 412 nm 吸光度 A1。
4. 測(cè)定管:取微量玻璃比色皿或 96 孔板,依次加入 20μl 上清液,140μl 試劑二,40μl 試劑三,混勻靜置 2min 后測(cè)定 412 nm 吸光度 A2。
注意:空白管只需要測(cè)定一次。
關(guān)鍵字: 還原型谷胱甘肽檢測(cè)試劑盒;
伊勢(shì)久(江蘇連云港)生物科技有限責(zé)任公司,成立于2019年,坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦,主要從事生化檢測(cè)、病理檢測(cè)和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運(yùn)行,其中包括150平米的超十萬級(jí)的潔凈車間。我司堅(jiān)持以自主研發(fā)為核心,現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運(yùn)核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品,熱銷市場(chǎng)以來收到了客戶的廣泛好評(píng)。
公司秉承“ 摯誠(chéng)科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念,聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新,努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅(jiān)持以客戶為中心,致力于為中國(guó)的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專業(yè)服務(wù),始終是我們努力的目標(biāo)和方向。