概述

2,2'-聯(lián)氮雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二銨鹽是一種化學(xué)物質(zhì)，主要用作過氧化物酶底物，化學(xué)式是C₁₈H₂₄N₆O₆S₄，分子量是548.68，可用ABTS縮寫表示。純凈的化合物呈現(xiàn)淺綠色至綠色，亮黃綠至深黃綠色的粉末狀態(tài)。

用途

1.常用于游離氯的光譜試劑，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的顯色底物，過氧化物酶的底物，用于ELISA 實(shí)驗(yàn)，該底物產(chǎn)生一種可溶性的顯綠色的螯合物，可使用405 nm光譜讀取OD值，可使用1%SDS終止反應(yīng)[1-2]。

2.用作抗氧化劑[3-5]。2 ,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽，如果與過二硫酸鉀反應(yīng)，可以生成綠色的ABTS自由基。該自由基在734nm有吸收，所以，通過檢測734nm的吸光度，可以測定的其濃度。一個物質(zhì)加入到ABTS自由基溶液后，如果734nm的吸光度降低，則說明該物質(zhì)具有自由基清除活性，屬于抗氧化劑。該法稱為ABTS自由基清除法，可以用評價植物（或中草藥抽提物）、純化合物的抗氧化能力的。此外，可以作為對血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液或各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力進(jìn)行檢測的試劑盒。不過，ABTS自由基的生成需要過二硫酸鉀氧化，所以，是一個混合物。而且，反應(yīng)通常需要12小時，比較耗時。

儲存條件

密封、2-8℃保存。運(yùn)輸過程中需要冰袋運(yùn)輸。

酶活性實(shí)驗(yàn)

研究了使用ABTS作為HRP綴合物底物的酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）的微技術(shù)。在4個底物的比較研究中，即; 5-氨基水楊酸（5AS），鄰苯二胺（OPD），O-聯(lián)甲苯胺（OT）和ABTS，對于HRP的敏感性，ABTS是最敏感，最穩(wěn)定，最具視覺效果的藍(lán)綠色[ 6]。 ABTS是典型的過氧化物酶底物。為了純化和表征，過氧化物酶陽性轉(zhuǎn)化體在培養(yǎng)上清液中產(chǎn)生活性蛋白的條件下大規(guī)模培養(yǎng)（XL）。培養(yǎng)160小時后，獲得相對于底物ABTS的55,000U / L的活性，并收獲含有過氧化物酶的上清液。以ABTS為底物，當(dāng)H₂O₂濃度超過0.125mM時，過氧化物酶活性顯著下降，表明該酶被H₂O₂抑制。反應(yīng)速率取決于測試的底物，其值在31.2和125μM之間[7]。

使用溫度控制的多模板讀數(shù)器或者在UV / Vis分光光度計(jì)中光度測定酶活性。通過添加酶引發(fā)反應(yīng)。在25℃，在適當(dāng)?shù)幕|(zhì)波長下，在10分鐘內(nèi)測量酶活性。一個單位（1U）定義為每分鐘轉(zhuǎn)化1μmol底物的酶量。各種H₂O₂濃度（0-1250μM，酶濃度（0.27-54 nM）和底物濃度）用于測定酶活性。在pH3.8的100mM乙酸鈉緩沖液和最終H₂O₂濃度下測定rPsaDyP對ABTS的活性。在420nm（ε42036,000Lmol-1 cm-1）下研究ABTS陽離子自由基的產(chǎn)生[7]。

參考文獻(xiàn)

[1]周莉娜,毛暉,曲東.全氟辛酸和雌二醇對黃孢原毛平革菌過氧化物酶活性的影響[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報, 2013, 032(006):1134-1142.

[2]張坤.基于生物礦化的酶@MnO₂納米復(fù)合酶的合成及其活性研究[D].新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院[2023-07-03].

[3]王智榮,崔春,林宗毅,等.海帶多糖及其純化組分的膽酸鹽吸附能力及抗氧化活性[J].食品科學(xué), 2016, 37(1):6.

[4]龍遠(yuǎn)春張欣萬國棟鄧澤元張兵.不同產(chǎn)地決明子蒽醌化合物組成及其抗氧化活性測定[J].食品科學(xué), 2017, 038(016):145-151.

[5]呂海鵬,張悅,陳興華,等.不同花色種類白茶的抗氧化活性及其主要品質(zhì)化學(xué)成分分析[J].食品科學(xué), 2016, 37(20):9.

[6]Matsuda H, et al. Evaluation of ELISA with ABTS, 2-2'-azino-di-(3-ethylbenzthiazoline sulfonic acid), as the substrate of peroxidase and its application to the diagnosis of schistosomiasis. Jpn J Exp Med. 1984 Jun;54(3):131-8.

[7]Lauber C, et al. Identification, heterologous expression and characterization of a dye-decolorizing peroxidase of Pleurotus sapidus. AMB Express. 2017 Aug 23;7(1):164.