背景及概述^[1][2]

三磷酸腺苷(ATP)是一種由一個(gè)腺嘌呤，一個(gè)核糖和一個(gè)三磷酸單位組成的核苷 酸藥物，分子式C10H16N5O13P3，分子量為507。它是生物體內(nèi)的能量轉(zhuǎn)換器和貯存器，在人體能量代謝中起著重要的作用。ATP也是生物體內(nèi)重要的代謝物質(zhì)，作為代謝的中間體、輔酶參與生物體內(nèi)脂肪、蛋白質(zhì)、糖類和核酸等的代謝。在臨床應(yīng)用上，ATP除了能作為搶救危重病人的輔助藥品外，還對(duì)急慢性肝炎、腎炎、心肌炎、冠狀動(dòng)脈硬化、進(jìn)行性肌肉萎縮、再生障礙性貧血、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等病癥具有良好的治療作用。本品為一種輔酶。三磷酸腺苷是核苷酸衍生物，參與體內(nèi)脂肪、蛋白質(zhì)、糖、核酸以及核苷酸的代謝。當(dāng)體內(nèi)吸收、分泌、肌肉收縮及進(jìn)行生化合成反應(yīng)等需要能量時(shí)，三磷酸腺苷即分解成二磷酸腺苷及磷酸基，同時(shí)釋放出能量，三磷酸腺苷二鈉能夠穿透血-腦脊液屏障，能提高神經(jīng)細(xì)胞膜性結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性和重建能力、促進(jìn)神經(jīng)突起的再生長(zhǎng)。 

制備^[1]

三磷酸腺苷的合成主要有化學(xué)合成法、酶催化合成、光合磷酸化和氧化磷酸化、微 生物酶系催化合成等方法?？紤]到藥品的安全性、環(huán)保、生產(chǎn)成本等因素，用腺苷為原料微 生物酶系催化合成三磷酸腺苷成為目前工業(yè)生產(chǎn)三磷酸腺苷的主要工藝。然而，我國(guó)三磷 酸腺苷生產(chǎn)水平總體還比較低，產(chǎn)品的產(chǎn)量、回收率、產(chǎn)品的純度等方面達(dá)不到進(jìn)口產(chǎn)品的 水平。

申請(qǐng)?zhí)枮?5100148.5的中國(guó)專利申請(qǐng)文件中公開(kāi)了一種“用腺苷（AR）為原料生產(chǎn) 腺苷三磷酸（ATP）的新工藝”。該工藝主要包括：啤酒酵母冷凍處理、發(fā)酵提酶、離心分離、腺 苷發(fā)酵合成ATP、酒精沉淀、沉淀物回溶、冷凍除鹽、稀釋后離子交換、樹(shù)脂洗滌洗脫、樹(shù)脂脫 色、活性炭除熱源、結(jié)晶、干燥等。該工藝由于酵母與轉(zhuǎn)化酶的分離不徹底，發(fā)酵后期酵母所產(chǎn)酶系成分變化，轉(zhuǎn)化酶活力下降,使得三磷酸腺苷轉(zhuǎn)化率為90%，而且發(fā)酵過(guò)程中因菌體衰老自溶等因素帶入較多雜物等問(wèn)題；其次在發(fā)酵合成液中除了有三磷酸腺苷外，還有未 反應(yīng)的AR及副反應(yīng)產(chǎn)物AMP、ADP，及微生物所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)磷酸氫二鉀、磷酸氫二鉀、硫酸 鎂等無(wú)機(jī)鹽。發(fā)酵合成液中無(wú)機(jī)鹽的濃度約4萬(wàn)mg/L。在離子交換吸附過(guò)程中，離子與ATP競(jìng) 爭(zhēng)吸附到離子交換樹(shù)脂上，造成樹(shù)脂吸附ATP量?jī)H約5～13克/100克樹(shù)脂（201×7），采用酒 精沉淀脫鹽工藝后樹(shù)脂吸附ATP量提高到18～22克/100克樹(shù)脂（201×7），但需要消耗ATP發(fā)酵液體積4～5倍的無(wú)水乙醇。三磷酸腺苷回收率和設(shè)備利用率低，產(chǎn)品中雜質(zhì)較多。

CN201510113434.7提供一種能提高ATP產(chǎn)品的生產(chǎn)能力、回收率、產(chǎn)品純度，降低化學(xué)試劑的消耗，簡(jiǎn)化生產(chǎn)工藝，減少污染排放，明顯提高經(jīng)濟(jì)效益的三磷酸腺苷的生產(chǎn)方法。本發(fā)明的目的是通過(guò)如下技術(shù)方案來(lái)完成的，一種三磷酸腺苷（ATP）的生產(chǎn)方法，它主要是利用酵母細(xì)胞內(nèi)的酶系統(tǒng)，以葡萄糖為能源經(jīng)糖酵解途徑使腺苷(AR)磷酸化合成三磷酸腺苷，所述的生產(chǎn)方法包括如下步驟：

a）發(fā)酵反應(yīng)鍋中加去離子水，將水的溫度升到30～42℃，定量投加啤酒酵母，再定 量投加葡萄糖、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀溶液，調(diào)節(jié)pH值在6.0～7.0范圍內(nèi)，保持溫度為30 ～42℃并發(fā)酵2.0～2.5小時(shí)提轉(zhuǎn)化酶，得到發(fā)酵提酶液；上述各反應(yīng)物的用量為：啤酒酵母泥250～280g/L，葡萄糖35～45 g/L，磷酸氫二鉀25～30 g/L，磷酸二氫鉀20～25 g/L。

b）發(fā)酵提酶液需經(jīng)過(guò)板框過(guò)濾去除酶液中顆粒度較大的酵母泥雜質(zhì)，得到粗濾提酶液；

c）經(jīng)過(guò)板框過(guò)濾的粗濾提酶液再經(jīng)過(guò)精度為0.1～10μm的微濾膜處理，進(jìn)一步去除細(xì)微的酵母等雜質(zhì)，得到清酶液；

d）在清酶液中加入反應(yīng)物腺苷20～40g/L，再加入營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)硫酸鎂1.6～2.0g/L， 調(diào)節(jié)pH值在6.0～7.0范圍內(nèi)，并在溫度為32～35℃條件下發(fā)酵4.0～6.0小時(shí)，腺苷由葡萄 糖提供能量，在轉(zhuǎn)化酶的催化作用下，腺苷磷酸化為三磷酸腺苷，三磷酸腺的濃度為36～ 72g/L；立即加冰水冷卻，將溫度降低到15～20℃；

e）采用截留分子量為150～500的納濾膜，通過(guò)納濾膜的選擇透過(guò)性能使單價(jià)的離子透過(guò)膜，三磷酸腺苷溶液中80%以上的無(wú)機(jī)鹽被去除，三磷酸腺苷因分子較大被納濾膜截 留在濃縮液中，得到三磷酸腺苷濃縮液；

f）經(jīng)過(guò)去除無(wú)機(jī)鹽的三磷酸腺苷合濃縮液用去離子水稀釋，使三磷酸腺苷的濃度 調(diào)整到0.5～1.5%；

g）上述稀釋后的三磷酸腺苷溶液通過(guò)201×7陰離子交換樹(shù)脂吸附，樹(shù)脂粒度 0.315～1.25mm；吸附結(jié)束后用去離子水和0.04～0.06%氯化鈉溶液洗滌，去除AR、AMP、ADP 等原料物和合成副產(chǎn)物，再用4.0～6.0%的氯化鈉溶液洗脫，得到三磷酸腺苷洗脫液；

h）三磷酸腺苷洗脫液經(jīng)過(guò)截留分子量為3000～10000的超濾膜處理去除蛋白質(zhì)和 熱源，通過(guò)活性炭吸附去除色度物質(zhì)；

i）上述經(jīng)過(guò)超濾膜處理和活性炭吸附的三磷酸腺苷洗脫液經(jīng)過(guò)無(wú)水乙醇沉淀、離心分離、淋洗和浸泡提純，得到三磷酸腺苷固體，無(wú)水乙醇的用量為三磷酸腺苷超濾膜透過(guò) 液的2.5～3.5倍，再經(jīng)過(guò)38～42℃的真空干燥，得到三磷酸腺苷成品。

本發(fā)明采用微濾處理提高轉(zhuǎn)化酶的純度，提高了三磷酸腺苷的合成轉(zhuǎn)化率；在三 磷酸腺苷發(fā)酵合成液的分離提純過(guò)程中采用納濾工藝將合成過(guò)程中添加的無(wú)機(jī)鹽類營(yíng)養(yǎng) 物質(zhì)去除，增強(qiáng)了離子交換樹(shù)脂吸附ATP的容量；采用超濾去除蛋白和熱源,提高產(chǎn)品的純度。本發(fā)明能使磷酸腺苷轉(zhuǎn)化率達(dá)到95%以上，總回收率由達(dá)到80%以上，純度提高到 98%以上。本發(fā)明具有能提高ATP產(chǎn)品的生產(chǎn)能力、回收率、產(chǎn)品純度，降低化學(xué)試劑的消耗，簡(jiǎn)化生產(chǎn)工藝，減少污染排放，明顯提高經(jīng)濟(jì)效益等特點(diǎn)。

藥理作用^[2]

三磷酸腺苷是核苷酸衍生物，參與體內(nèi)脂肪、蛋白質(zhì)、糖、核酸以及核苷酸的代謝。當(dāng)體內(nèi)吸收、分泌、肌肉收縮及進(jìn)行生化合成反應(yīng)等需要能量時(shí)，三磷酸腺苷即分解成二磷酸腺苷及磷酸基，同時(shí)釋放出能量，三磷酸腺苷二鈉能夠穿透血-腦脊液屏障，能提高神經(jīng)細(xì)胞膜性結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性和重建能力、促進(jìn)神經(jīng)突起的再生長(zhǎng)。

臨床應(yīng)用和適應(yīng)癥^[2]

用于進(jìn)行性肌萎縮、腦出血后遺癥、心功能不全，心肌疾患及肝炎等的輔助治療。

注意事項(xiàng)^[2]

1、腦出血初期患者禁用。

2、當(dāng)藥品性狀發(fā)生改變時(shí)禁止使用。

主要參考資料

[1] CN201510113434.7 一種三磷酸腺苷(ATP)的生產(chǎn)方法

[2] 三磷酸腺苷二鈉片說(shuō)明書(shū)