黃嘌呤氧化酶(xanthione oxidase, XOD)試劑盒說明書
微量法
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
XOD(EC 1.17.3.2)催化黃嘌呤氧化生成尿酸和超氧陰離子,是活性氧主要來源之一;同時也是核苷 酸代謝的關鍵酶之一。XOD 主要分布于哺乳動物的心,肺,肝臟等組織中,當肝功能受損時,XOD 大量 釋放到血清中,對肝損害的診斷具有特異性的意義。
測定原理:
XOD 催化黃嘌呤產生尿酸,尿酸在 290nm 下有特征吸收峰。
需自備儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、研缽、 冰和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
1、細菌、細胞或組織樣品的制備: 細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(10 4個): 提取液體積(ml)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液),超聲波破碎細菌或 細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰 上待測。
組織:按照組織質量(g):提取液體積(ml)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml 提 取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定步驟:
1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,調節(jié)波長至 290nm,蒸餾水調零。
2、 XOD 檢測工作液的配制: OX004-50T/48S 用時在每瓶試劑二先加入 0.21ml 試劑三確保溶解混勻后,再加入試劑一定容至 7.5ml,充分混勻,現(xiàn)配現(xiàn)用。 OX004-100T/96S 用時在每瓶試劑二先加入 0.42ml 試劑三確保溶解混勻后,再加入試劑一定容至 15ml,充分混勻,現(xiàn)配現(xiàn)用。 3、 測定前將 XOD 檢測工作液在 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)水浴 10min 以上。
4、 準備 96 孔 UV 板一塊(非普通酶標板,普通酶標板只能透過可見光,不能透過紫外光,檢測波長 小于 340nm 務必使用 UV 板)。
5、在微量石英比色皿或 96 孔 UV 板中加入 10μl 樣本和 200μl 工作液,立即混勻并計時,記錄 290nm 下初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。計算ΔA=A2-A1。
關鍵字: 黃嘌呤氧化酶(XOD)檢測試劑;
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