脯氨酸（Pro）含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

微量法 100 管/96 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

Pro 廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，逆境條件下，植物體內(nèi) Pro 含量顯著增加。Pro 增 加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性強(qiáng)的品種往往積累較多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作為 抗逆育種的生理指標(biāo)之一。 

測(cè)定原理：

用磺基水楊酸（SA）提取 Pro，加熱處理后，Pro 與酸性茚三酮溶液反應(yīng)生成紅色；加甲苯萃取后， 在 520nm 測(cè)定吸光度。

自備儀器和用品： 

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、冰乙酸 25ml、 甲苯 50ml、研缽、冰和蒸餾水。

樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備： 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10 4個(gè)）：提取 液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞 （冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；之后置 95℃水浴振蕩提取 10min；10000g， 25℃離心 10min，取上清，冷卻后待測(cè)。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）， 勻漿；之后置 95℃水浴振蕩提取 10min；10000g，25℃離心 10min，取上清，冷卻后待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：按照血清（漿）體積（ml）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議取 0.1ml 血清 （漿）加入 1ml 提取液），充分混勻，之后置 95℃水浴振蕩提取 10 分鐘，10000g，25℃離心 10 分鐘，取 上清，冷卻后待測(cè)。

測(cè)定步驟： 

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 520nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定：

(1) 取 0.25ml 樣本+0.25ml 試劑一+0.25ml 試劑二 于有蓋 EP 管中，置 95℃水浴中保溫 30min（蓋緊，防 止水分散失），每 10min 振蕩一次。

(2) 待冷卻后，加入 0.5ml 試劑三，振蕩 30s，靜置片刻，使色素轉(zhuǎn)至試劑三中；吸取 0.2ml 上層溶液于微 量石英比色皿或 96 孔板中，于 520nm 波長(zhǎng)處比色，記錄吸光值 A。

溫馨提示：本產(chǎn)品不可用于臨床，折扣詳詢客服。