貨號 | 名稱 | 規(guī)格 | 存儲 |
B8204C7 | RNA恒溫快速擴增試劑盒（RNA基礎(chǔ)型） | 48T | -20℃ |
【產(chǎn)品用途】本產(chǎn)品可應(yīng)用于核酸 RNA 的快速擴增。
【檢測原理】本產(chǎn)品是基于重組酶介導(dǎo)鏈置換核酸擴增（Recombinase-aid Amplification，RAA）技術(shù)開發(fā)的恒溫核酸擴增檢測試劑，在42℃恒溫條件下特異識別并擴增目標(biāo)樣本的RNA片段，用瓊脂糖凝膠電泳檢測判斷。
【技術(shù)原理】重組酶介導(dǎo)鏈置換核酸擴增（Recombinase-aid Amplification，RAA），是一種恒溫核酸快速擴增技術(shù)。 RT-RAA先利用逆轉(zhuǎn)錄酶將 RNA 逆轉(zhuǎn)錄成 cDNA，從細菌或真菌中獲得的重組酶在常溫下可與引物DNA緊密結(jié)合，形 成重組酶/引物復(fù)合體，侵入RNA-cDNA雙鏈核酸模板，在侵入位點重組酶將雙鏈打開，同時單鏈結(jié)合蛋白結(jié)合到被重 組酶打開的單鏈上，維持雙鏈模板處于開鏈狀態(tài)。重組酶/引物復(fù)合體開始對雙鏈進行掃描，當(dāng)引物在模板上搜索到與之完全匹配的互補序列時，重組酶/引物復(fù)合體解體，DNA聚合酶結(jié)合到引物的3’端，開始合成新鏈。合成的新鏈又可以作為模板，最終擴增產(chǎn)物以指數(shù)級增長，完成靶標(biāo)基因的擴增。本試劑盒具有快速、靈敏度高以及特異性強等優(yōu)點，反應(yīng)組分已混合并冷凍干燥成反應(yīng)干粉，操作簡便，易于保存。
【引物設(shè)計】RAA核酸擴增技術(shù)對引物設(shè)計的要求與常規(guī)PCR引物設(shè)計有一定的區(qū)別。由兩條寡核苷酸組成一對引物， 分別特異性識別一個核酸目標(biāo)物的上下游核苷酸序列；引物長度在30-35nt之間，序列中無回文序列、連續(xù)單堿基重復(fù)序 列和內(nèi)部二級結(jié)構(gòu)區(qū)；引物Tm值不作為設(shè)計時主要考慮因素；最佳引物對需通過試驗優(yōu)化篩選得到，要求其擴增產(chǎn)物為單一條帶，無非特異性擴增和明顯的引物二聚體。
建議：在開展RT-RAA （基礎(chǔ)型）擴增反應(yīng)之前，先進行引物的篩選試驗， 以便得到較高的檢測靈敏度。
【產(chǎn)品組成】
產(chǎn)品組成 | 包裝規(guī)格 |
反應(yīng)干粉 | 8T/條×6 條 |
A Buffer | 1.5 mL/管×1 管 |
B Buffer | 200 μL/管×1 管 |
使用說明書 | 1份 |
【儲存條件及有效期】本產(chǎn)品存儲于-20±5℃、干燥、避光條件下；有效期為12個月。
【適用儀器】恒溫金屬浴、恒溫水浴鍋或恒溫培養(yǎng)箱等。
【檢測步驟】
1. RNA樣本提?。?/span>請參考傳統(tǒng) Trizol 方法或其他同效商品化試劑盒提取RNA樣本。
2. 樣本檢測
2.1 單管反應(yīng)體系（50μL）： 推薦反應(yīng)體系（模板用量為5μL）：
反應(yīng)干粉 1 管 反應(yīng)干粉 1 管
A Buffer 25 μL A Buffer 25 μL
上游引物(10 μM) 2.0 μL 上游引物(10 μM) 2.0 μL
下游引物(10 μM) 2.0 μL 下游引物(10 μM) 2.0 μL
RNA樣本和水 18.5μL 水 13.5μL
B Buffer 2.5μL RNA樣本 5 μL
B Buffer 2.5μL
總體積 50.0μL
總體積 50.0μL
2.2 操作步驟
2.2.1 根據(jù)反應(yīng)數(shù)量，按照反應(yīng)體系配制含有水、A Buffer、上游引物(10μM)、下游引物(10μM)的 Mix，混合均勻后加入裝有反應(yīng)干粉的檢測單元管中;
2.2.2 向檢測單元管中加入經(jīng)步驟1處理得到的待測RNA樣本；
2.2.3 再向檢測單元管蓋上加入2.5 μL 的B Buffer，蓋上管蓋，上下顛倒充分混勻5-6次，低速離心10sec； （注：本步驟“是否充分混勻”將決定實驗結(jié)果的重復(fù)性）
2.2.4 將檢測單元管放入42℃ 恒溫金屬浴（或恒溫水浴鍋、恒溫培養(yǎng)箱等）中，孵育30min。
2.2.5 反應(yīng)結(jié)束后，在檢測單元管中加入50μL酚:氯仿:異戊醇（25:24:1）抽提液，充分混勻后12000rpm/min離心5min，取上清進行電泳檢測。（此步驟除去反應(yīng)體系中對電泳結(jié)果有影響的蛋白類成分）
【結(jié)果分析與判定】
使用凝膠成像儀進行圖像采集和分析，對比擴增條帶是否與目的片段大小一致。
【注意事項】
1. 在同一核酸提取方法下，不同樣品類型所提取的核酸含量和純度會有明顯差異，導(dǎo)致擴增效率不同；
2. 當(dāng)實驗室環(huán)境、試劑、儀器或配件存在陽性物質(zhì)（例如質(zhì)粒、擴增產(chǎn)物等）污染，或樣本間存在交叉污染的情況，則會影響檢測結(jié)果準確性，出現(xiàn)假陽性結(jié)果；
3. 務(wù)必保證試劑保存、配制或運輸?shù)卯?dāng)，否則可能導(dǎo)致試劑檢測性能下降，出現(xiàn)假陰性結(jié)果；
4. 請嚴格按照本說明書和基因擴增實驗室的管理規(guī)范進行試驗操作；
5. 實驗結(jié)束后，檢測過程中所產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)按照相關(guān)規(guī)范進行處理。
相關(guān)產(chǎn)品：
貨號 | 產(chǎn)品 | 規(guī)格 |
B8201C1 | DNA恒溫快速擴增試劑盒（DNA基礎(chǔ)型） | 48T |
B8202C3 | DNA恒溫快速擴增試劑盒（DNA熒光型） | 48T |
B8203C5 | DNA恒溫快速擴增試劑盒（DNA試紙條型） | 48T |
B8204C7 | RNA恒溫快速擴增試劑盒（RNA基礎(chǔ)型） | 48T |
B8205C9 | RNA恒溫快速擴增試劑盒（RNA熒光型） | 48T |
B8206C0 | RNA恒溫快速擴增試劑盒（RNA試紙條型） | 48T |
JY0209 | 雙靶標(biāo)HybriDetect側(cè)向?qū)游鲈嚰垪l（彩虹型） | 50T |
JY0201 | 單靶標(biāo)HybriDetect側(cè)向?qū)游鲈嚰垪l（彩虹型） | 50T |
JY0301 | CRISPR Cas12/13 HybriDetect試紙條 | 50T |
JY0308 | CRISPR雙酶切檢測試紙條（變色龍） | 50T |
關(guān)鍵字： RPA;RAA;RNA恒溫快速擴增;
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