方法一、酶解-樹脂法
酶解 取100kg新鮮腸黏膜(總固體5%-7%)，加苯酚200ml (0.2%)，如氣溫低時可不加。在攪拌下加入絞碎胰0.5-1kg(0.5%-1%)，用 300-400g/L(30%-40%)NaOH溶液調(diào)節(jié)pH8.5-9，升溫至40-45℃，保溫2-3h。pH8，再加5kg粗食鹽(5%)升溫至90℃左右，用6mol/L HCl調(diào)節(jié)pH 6.5左右，停止攪拌，保溫20min，以布袋過濾，得酶解濾液。
腸黏膜[胰漿，NaOH]→[pH8.5-9, 40-45℃, 保溫2-3h]腸黏膜液[NaCl, 6mol/L HCl]→[pH8; 90℃, pH6.5]濾液
吸附、洗滌、洗脫 取上述濾液冷至50℃以下，用6mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH7，加入5kgD-254強堿性陰離子交換樹脂，攪拌5h左右，交換完畢，棄去液體，用自來水漂洗樹脂至水清，用與樹脂等體積的2mol/L NaCl，攪拌洗滌15min，棄去洗滌液，再加2倍樹脂體積的1.2mol/L NaCl洗滌2次。用約樹脂體積一半的5mol/L NaCl洗脫1h，收集洗脫液，然后用約樹脂體積的1/3的3mol/L NaCl洗脫2次，合并洗脫液。
濾液[D-254樹脂, NaOH]→[pH7, 5h]吸附物[NaCl]→[2mol/L→1.2mol/L, →5mol/L, →3mol/L]洗脫液
沉淀、脫水、干燥 將洗脫液用濾紙漿助濾，過濾1次，澄清濾液以體積計加入用活性炭處理過的0.9倍的95%乙醇，冷處沉淀8-12h。虹吸上清液棄去，按100kg黏膜加300ml的比例向沉淀中補加蒸餾水，再加入4倍量95%乙醇，冷處放置6h，收集沉淀，用無水乙醇脫水1次，丙酮脫水2次，置P2O5干燥器中真空干燥，得肝素鈉粗品。
洗脫液[95%乙醇]→[8-12h]沉淀物[無水乙醇；丙酮]→[P2O5]肝素鈉粗品
脫色、沉淀、干燥 用20g/L(2%)氯化鈉溶液配成100 g/L(10%)的肝素鈉溶液，以40g/L(4%)高錳酸鉀溶液進行氧化脫色，每億單位估計加入0.65mol高錳酸鉀。先將藥液調(diào)至pH8，預熱80℃，在攪拌下加入高錳酸鉀，保溫2.5h，以滑石粉作助濾劑，過濾，收集濾液。將濾液調(diào)節(jié)pH6.4，用0.9倍的95%乙醇置于冷處理沉淀6h以上，收集沉淀，溶于10 g/L(1%)氯化鈉溶液中，用量按肝素鈉粗品質(zhì)量收率60%-70%計，配成50 g/L(5%)肝素鈉溶液，再用4倍量的95%乙醇冷處放置6h以上，收集沉淀物，用無水乙醇、丙酮脫水，乙醚洗滌1次，置P2O5干燥器中干燥，得肝素鈉精品。腸黏膜換算成總固體7%計，收率20000U/kg，最高效價141.6U/mg。
肝素鈉粗品[20g/L NaCl]→肝素鈉溶液[KMnO4]→[pH8, 80℃, 2.5h]濾液[95%乙醇]→[pH6.4, 6h]沉淀物[無水乙醇；丙酮；乙醚]→肝素鈉精品
注射劑的制備 取肝素鈉成品溶于一定量注射用水中，封口，滅菌，即得。
肝素鈉精品[注射用水]→注射劑
方法二、鹽解-樹脂法
提取 取新鮮豬腸黏膜投入反應鍋中，按30g/L(3%)加入氯化鈉，NaOH調(diào)節(jié)pH9，逐步升溫至50-55℃，保溫2h，繼續(xù)升溫至95℃，維持10min，冷卻50℃以下，用30目雙層紗布過濾，收集濾液。
豬腸粘膜[NaCl; NaOH]→[pH9; 50-55℃]濾液
吸附、洗滌、洗脫、沉淀 取冷卻50℃以下的濾液，加入714型(強堿性)Cl-型樹脂(新樹脂用量為2%)，攪拌8h后靜置過夜。次日虹吸除去上層液，收集樹脂，用水沖洗至洗液澄清，濾干，用2倍量1.4mol/L氯化鈉攪拌2h，濾干；再用1倍量1.4mol/L氯化鈉攪拌2h，濾干；繼續(xù)改用2倍樹脂量的3mol/L氯化鈉攪拌洗脫8h，濾干；再用1倍量3mol/L氯化鈉攪拌洗脫2h，濾干，合并濾液，加入等量95%乙醇沉淀，過夜，虹吸除去上清液，收集沉淀。丙酮脫水干燥，得粗品。
濾液[714型樹脂]→吸附物[NaCl]→[1.4mol/L, 3mol/L]洗脫液[95%乙醇，丙酮]→粗品
溶解、脫色、沉淀、干燥 粗品溶于15倍10 g/L(1%)氯化鈉溶液中，加入6mol/L鹽酸調(diào)pH1.5左右，過濾至清，隨即用5mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH11，按3%加入過氧化氫(濃度為30%)25℃放置。開始不斷調(diào)整pH至11，第2天再按1%加入過氧化氫，調(diào)整pH11，繼續(xù)放置，共48h。過濾，用6mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH6.5，加入等量的95%乙醇沉淀。過夜。次日虹吸除去上清液，沉淀用丙酮洗滌脫水，干燥，即得肝素鈉精品?？偸章?0000U/kg腸黏膜(按腸黏膜的固體量為5%-7%計算)。
粗品[1%NaCl, 6mol/L HCL]→[pH1.5]濾液[NaOH, H2O2]→[pH11, 25℃, 48h]濾液[6mol/L HCl, 95%乙醇]→[pH6.5, 24h]沉淀[丙酮]→肝素鈉精品
方法三、CTAB*提取法(*十六烷基三甲基溴化胺為長鏈季銨鹽)
提取、絡合 按豬腸黏膜液(V)：Na2SO4(m)：硫酸鋁(m)：CTAB(V)=1：0.15：0.04：0.001的配料比投料。取新鮮豬小腸黏膜投入反應罐中，攪拌下加入硫酸鈉，溶解后，用堿液調(diào)節(jié)pH11-11.5，升溫50℃，保溫攪拌2h，再加硫酸鋁，溶解后，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH7.5-8，升溫至95℃，保溫10min，趁熱過濾，待濾液冷卻至60℃以下時，緩緩加入CTAB和硅藻土，攪拌吸附1h，靜置過夜，濾餅用40℃熱蒸餾水洗至無色，抽干即得絡合物。
豬腸黏膜液[Na2SO4，堿液， Al2(SO4)3]→[pH11-11.5, 50℃, 2h; pH7.5-8, 95℃, 10min]提取液[CTAB， 硅藻土]→[60℃以下，1h]濾餅[蒸餾水]→[40℃]絡合物
解離、沉淀 取絡合物溶于適量氯化鈉溶液中，以冰醋酸調(diào)pH4，升溫60℃，保溫30min，靜置過夜。次日吸取上清液，離心，收集清液，加入95%乙醇沉淀，再放置過夜，沉淀用丙酮洗滌，干燥即得肝素鈉粗品。
絡合物[NaCl, 冰醋酸]→[pH4, 60℃, 30min]濾液[95%乙醇，丙酮]→粗品
脫色、沉淀、去鉀離子、干燥 將粗品用25倍新鮮配制的氯化鈉溶液溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH8，升溫80℃后，加入適量的KMnO4溶液脫色，至顏色不退為止。過濾，濾液冷卻后，加0.9倍95%乙醇沉淀，靜置過夜。離心，沉淀加蒸餾水溶解，加強酸性苯乙烯陽離子樹脂001×8，攪拌30min，過濾，濾液加10g/L (1%)的氯化鈉，調(diào)pH10.5-11，按體積再加1%過氧化氫溶液，保持25℃，靜置2天。過濾，濾液加等量的95%乙醇沉淀，靜置24h，沉淀用乙醇、丙酮洗滌，真空干燥或冰凍干燥即得肝素成品。按腸黏液計，收率11000-15000U/kg。
粗品[NaCl, NaOH, KMnO4]→[pH8, 80℃]脫色液[95%乙醇]→沉淀物[水，001×8樹脂]→[30min]去鉀離子液[10g/L NaCl, H2O2]→[pH10.5-11, 25℃, 48h]脫色液[95%乙醇]→[24h]沉淀物[乙醇、丙酮]→肝素成品
方法四、以牛肺為原料
原料處理 取凍牛肺融化后，剪去主氣管和較大氣管，然后剪成長條，置絞碎機中用3mm絞板絞碎成肉糜狀，所得凈肺糜量為毛肺的70%-80%。
牛肺→[融化，絞碎]牛肺漿
自溶、提取、沉淀 取牛肺糜300kg，加水150g，攪拌均勻，加溫45℃，加入甲苯6L，在39-41℃保溫自溶20h，每半小時攪拌1次。再取27kg硫酸銨溶于90kg水中，加入自溶液中，用400g/L(40%)NaOH溶液調(diào)節(jié)pH8.8-9.2，水浴加溫至50℃，保溫攪拌1h，繼續(xù)加熱，在3h內(nèi)升溫至90℃，保溫20min，冷卻至50℃以下，布袋過濾，濾渣壓濾，濾餅加100kg水和硫酸銨6kg再提取1次，棄去濾渣，合并2次提取液，約得提取液1.5-1.6kg/kg凈肺重。將提取液用20%H2SO4調(diào)節(jié)pH2.5，放置過夜。沉淀肝素·蛋白絡合物，虹吸棄去上清液，綢布過濾，沉淀用5倍量乙醇攪拌浸泡1h，過濾，濾渣再用5倍量乙醇攪拌洗滌2次，除去脂肪，濾干，得粗制濕品，收率1.2%-1.4%。
牛肺漿[自來水，甲苯]→[39-41℃, 20h]自溶液[(NH4)2SO4, 水，NaOH]→[pH8.8-9.2, 50℃, 1h]自溶液[90℃，20min]→提取液[H2SO4]→[pH2.5, 24h]肝素·蛋白絡合物[乙醇]→[1h]粗品
解離 將粗品加入5倍量水和少量400g/L(40%)NaOH，調(diào)pH9-10，球磨半小時，使之成糨糊狀，繼續(xù)加水至粗品量的20倍，滴加40%NaOH至全溶，最終pH10。加入NaCl達100 g/L(10%)，用20% H2SO4調(diào)pH2.5，靜置過夜。吸取上清液，過濾，沉淀用2倍量的pH2.5、10%NaCl溶液洗滌1次，合并上層清液和洗滌液，得黃色透明肝素溶液。
粗品[水，NaOH]→[pH9-10]糊狀物[水，NaOH]→[pH10]溶液[NaCl, H2SO4]→[pH2.5, 24h]肝素溶液
提純、干燥 上述肝素溶液中加入等量水，用2mol/L NaOH液調(diào)pH7。按總體積計算稱取溴化十五烷吡啶(PPB)25g，加水溶解成5%溶液，置分液漏斗中，用乙醚振搖3-4次，直至醚層完全無色為止，分出水層。在攪拌下將紅色清液滴加于肝素溶液中，冰箱中靜置過夜。收集沉淀，用蒸餾水洗滌2-3次，至洗液對1mol/L KSCN溶液無反應為止。沉淀用2mol/L NaCl溶液溶解，0.1mol/L NaOH溶液調(diào)pH7，2500r/min離心10min，去油狀物，離心液布氏漏斗濾清，清液加入0.8倍量的丙酮，置冰箱中過夜。離心，收集沉淀，丙酮洗滌2-3次，置P2O5真空干燥器中干燥，得灰白色粉末肝素精品。按凈肺質(zhì)量計，收率0.11g/kg，效價90-100U/mg。
肝素溶液[水，NaOH, PPB]→[pH7]沉淀物[水，NaCl, NaOH]→[pH7]精品
脫色、除熱原、干燥 將精品溶于15倍量的蒸餾水中，滴加1mol/L NaOH至pH8.5-9，濾去不溶物。按溶液體積以2%、0.5%、0.5%和1% 4次加入30% H2O2溶液，保持pH8.5-9，20h脫色完畢，過濾除去氧化物，得肝素脫色液。再滴加5mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH12-13，室溫放置24h，按無熱原操作法過濾，清液用5mol/L鹽酸調(diào)pH7左右，再按溶液體積加入10g/L(1%)經(jīng)250℃烘干1h的無熱原NaCl，攪拌下加入0.8倍的丙酮，置冰箱4-5h，離心，收集沉淀。用50%丙酮洗滌2次，無水丙酮洗滌2次，乙醚洗滌1次，置P2O5真空干燥器中干燥，即得白色粉末狀的肝素成品。按凈肺質(zhì)量計，收率9000 U/kg，效價130-140U/mg。
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