背景[1-6]
異硫氰酸熒光素標(biāo)記胰島素（Insulin-FITC）是用異硫氰酸熒光素標(biāo)記的胰島素。胰島素是由胰臟內(nèi)的胰島β細(xì)胞受內(nèi)源性或外源性物質(zhì)如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一種蛋白質(zhì)激素。
胰島素是機(jī)體內(nèi)唯一降低血糖的激素，同時(shí)促進(jìn)糖原、脂肪、蛋白質(zhì)合成。外源性胰島素主要用來糖尿病治療。熒光素是最常用于標(biāo)記抗體的標(biāo)記物之一。熒光素經(jīng)恰當(dāng)?shù)募ぐl(fā)可發(fā)光，從而得知抗體的定位和待測(cè)抗原的分布情況，主要用于細(xì)胞分選或高分辨率免疫染色，是一種非常好的亞細(xì)胞水平精確定位的方法。酶標(biāo)記抗體是將酶與特異性抗體經(jīng)適當(dāng)方法連接而成，其應(yīng)用范圍非常廣泛，結(jié)果即時(shí)可見、敏感性高，但較難應(yīng)用于定量分析。
同種族動(dòng)物（人、牛、羊、豬等）的胰島素功能大體相同，成分稍有差異。圖中為人胰島素化學(xué)結(jié)構(gòu)。胰島素由A、B兩個(gè)肽鏈組成。人胰島素(Insulin Human)A鏈有11種21個(gè)氨基酸，B鏈有15種30個(gè)氨基酸，共16種51個(gè)氨基酸組成。其中A7(Cys)-B7(Cys)、A20(Cys)-B19(Cys)四個(gè)半胱氨酸中的巰基形成兩個(gè)二硫鍵，使A、B兩鏈連接起來。此外A鏈中A6(Cys)與A11(Cys)之間也存在一個(gè)二硫鍵。胰島素的主要生理作用是調(diào)節(jié)代謝過程。
對(duì)糖代謝：促進(jìn)組織細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取和利用，促進(jìn)糖原合成，抑制糖異生，使血糖降低；對(duì)脂肪代謝：促進(jìn)脂肪酸合成和脂肪貯存，減少脂肪分解；對(duì)蛋白質(zhì)：促進(jìn)氨基酸進(jìn)入細(xì)胞，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成的各個(gè)環(huán)節(jié)以增加蛋白質(zhì)合成?？偟淖饔檬谴龠M(jìn)合成代謝。胰島素是機(jī)體內(nèi)唯一降低血糖的激素，也是唯一同時(shí)促進(jìn)糖原、脂肪、蛋白質(zhì)合成的激素。作用機(jī)理屬于受體酪氨酸激酶機(jī)制。
應(yīng)用[7][8]
異硫氰酸熒光素標(biāo)記胰島素可用于氨基化明膠的性能及在鼻粘膜給藥的應(yīng)用研究：
在無外加乳化劑的條件下，將氨基化明膠的水溶液分散在橄欖油中，經(jīng)乳化、膠凝、脫水及交聯(lián)等過程，制備了一種新型帶正電荷的凝膠微球—氨基化明膠微球。微球平均粒徑為40～50μm，大小分布均勻。干燥微球可吸收相當(dāng)于自身重量約20倍的水形成水凝膠。氨基化明膠微球比明膠微球具有較高的氨基含量，在蒸餾水及磷酸鹽緩沖液中均荷正電，在蒸餾水中的Zata電位為41.5mV。
隨著制備微球時(shí)交聯(lián)劑戊二醛濃度的增大或交聯(lián)反應(yīng)時(shí)間的延長，微球的氨基含量降低。但無論交聯(lián)反應(yīng)的條件如何，本方法制備的氨基化明膠微球比明膠微球具有較高的伯氨基含量。氨基化明膠微球在胰蛋白酶存在的條件下可迅速降解(＜1h)，在胃蛋白酶及酸堿介質(zhì)環(huán)境中降解較為緩慢(＞20h)。氨基化明膠微球與粘蛋白之間的相互作用比明膠微球強(qiáng)。氨基化明膠微球較高的正電荷密度是它與粘蛋白間較強(qiáng)相互作用的主要原因。結(jié)合熒光標(biāo)記法及體外酶降解技術(shù)，利用離體大鼠胃灌流沖洗模型和大鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究了氨基化明膠微球的生物粘附性能。
結(jié)果表明，在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，滯留在離體大鼠胃中的氨基化明膠微球的數(shù)量比明膠微球多，而灌流沖洗液的種類（人工胃液或PH 7人磷酸鹽緩沖液）對(duì)微球的胃滯留性無顯著影響，這表明微球與胃粘液之間的靜電相互作用不是這一模型中微球胃滯留性的決定性因素。但是，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)滯留在離體大鼠胃中的氨基化明膠微球的量隨制備微球時(shí)交聯(lián)劑戊二醛濃度的增大而減少，這表明氨基化明膠微球的胃粘膜粘附性可能受微球表面氨基含量或交聯(lián)度的影響。
大鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，氨基化明膠微球比明膠微球具有較好的粘膜粘附性能。以健康大鼠為模型動(dòng)物，考察了氨基化明膠對(duì)葡聚糖和胰島素鼻粘膜吸收的促進(jìn)作用。結(jié)果表明，02％（WN）氨基化明膠可以顯著促進(jìn)分于量為女4kDa的異硫氰酸熒光素－葡聚糖從大鼠鼻粘膜的吸收，生物利用度為23．8％。鼻腔給予含0二％（w／v）氨基化明膠的胰島素磷酸鹽緩沖液10 IU帥）后，血糖水平與給予胰島素的磷酸鹽緩沖液相比顯著降低。
參考文獻(xiàn)
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