溶劑紅 27又稱油紅O，該染料對脂肪變性、脂質(zhì)沉積的組織器官有良好的溶脂及吸附作用,它具有操作簡便、色彩鮮亮等特點,優(yōu)于蘇丹III染液,被廣泛運用于臨床和科研病理工作中。針式濾膜過濾器原用于過濾色譜分析樣品及流動相,對色譜柱的保護、防止進樣閥和輸液泵管系統(tǒng)被污染等具有較好的作用,廣泛應(yīng)用于無菌實驗、膠體分離及質(zhì)量與微量分析。溶劑紅 27染液中含醇類物質(zhì)易揮發(fā)且雜質(zhì)多,因此傳統(tǒng)染色需要異丙醇漂洗分色,整個步驟歷時較長且不易控制,對人體也有吸人性危害。本文現(xiàn)介紹一種新型、高效的針式濾膜過濾器溶劑紅 27染色方法,與傳統(tǒng)方法相比具有快速高效、經(jīng)濟環(huán)保的優(yōu)勢。

方法

1、傳統(tǒng)溶劑紅 27染色方法

(1)常規(guī)冷凍切片將高脂小鼠肝臟樣本切片6~8 um厚,貼于載玻片,立即置于10%中性福爾馬林固定3min,雙蒸水清洗;(2)取溶劑紅 27儲備液與雙蒸水為3:2混合后,裝入潔凈EP管靜置10min;(3)將切片放入60%異丙醇清洗后置于配制好的溶劑紅 27染液10min;(4)用60%異丙醇清洗多余染液，雙蒸水清洗3次;(5)蘇木精復(fù)染1min,1%鹽酸乙醇分化,流水返藍3min;(6)甘油明膠封固。

2、針式濾膜過濾器溶劑紅 27染色法

(1)常規(guī)冷凍切片將高脂小鼠肝臟樣本切片6~8 pm厚,貼于載玻片,立即置于10%中性福爾馬林固定3min,雙蒸水清洗;(2)取溶劑紅 27儲備液與雙蒸水為1:1混合,裝入潔凈EP管內(nèi)備用(圖1);(3)將切片從水中取出瀝水后平鋪于濕盒內(nèi),注意不要干片;(4)用注射器吸取配制好的溶劑紅 27染液,由針式濾膜過濾器(0.22m)上端接口處注入,過濾后的染液直接經(jīng)過濾器下端均勻滴染在組織處(圖2),約30s后放人雙蒸水中清洗1次;(5)蘇木精復(fù)染1min,1%鹽酸乙醇分化,流水返藍3min;(6)甘油明膠封固。

結(jié)果

肝臟組織形成脂肪樣變時,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)脂肪聚集為脂肪小體,進而融合成脂滴,以大小不等的空泡狀、部分細(xì)胞核偏向細(xì)胞的一側(cè)形式存在。溶劑紅 27染料的脂溶作用和吸附作用將脂滴染成鮮紅色,細(xì)胞核呈藍色。傳統(tǒng)溶劑紅 27染色法靜置使染液中的雜質(zhì)顆粒沉淀、切片經(jīng)60%異丙醇清洗、分色等環(huán)節(jié)[增加制片的時間,且染色用時較長(從切片到染色整個過程約30min)(圖3);而運用針式濾膜過濾器溶劑紅 27染色法，不但避免沉淀、清洗、分色環(huán)節(jié),還縮短了染色時間(從切片到染色整個過程約10 min),最終能達到相同效果，從而大大降低時間成本,提高染色效率(圖4)。

參考文獻

[1]陳菲,李麗,牛鈺清,等. 介紹一種新型高效的油紅O染色法[J]. 臨床與實驗病理學(xué)雜志,2018,34(7):808-809. DOI:10.13315/j.cnki.cjcep.2018.07.028.