背景^[1-6]

HA抗體(小鼠單抗)是高純度的小鼠單克隆抗體，屬IgG2b同型，免疫原為人工合成的HA標(biāo)簽多肽序列(YPYDVPDYA)。該抗體能高度特異識(shí)別重組蛋白C末端、N末端或內(nèi)部的HA標(biāo)簽(YPYDVPDYA)，適用于定性或定量檢測(cè)HA融合表達(dá)蛋白。

ha標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個(gè)ha(流感病毒血凝素，influenza hemagglutinin epitope:ypydvpdya)短肽肽融合到目標(biāo)蛋白。ha標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的c端或n端，該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于多種細(xì)胞類型，相應(yīng)的ha標(biāo)簽抗體也被廣泛應(yīng)用。ha標(biāo)簽抗體能特異識(shí)別c末端或n末端帶有ha標(biāo)簽(ha-tagged)的融合蛋白，可可以用于檢測(cè)和ha tag融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測(cè)ha tag融合表達(dá)蛋白等。

HA抗體(小鼠單抗)用經(jīng)過(guò)適當(dāng)修飾的人工合成human influenza virushemagglutinin(HA)98-106位多肽YPYDVPDYA作為抗原制備而成的抗HA小鼠單克隆抗體?？寺√?hào)為HA-7。HA抗體可以用于識(shí)別human influenza virus hemagglutinin(HA)，但更為廣泛地用于HA tag融合表達(dá)蛋白的檢測(cè)?？贵w可以檢測(cè)位于融合蛋白N-terminal的HA tag，也可檢測(cè)位于融合蛋白C-terminal的HA tag。DNA重組技術(shù)使給目標(biāo)蛋白帶上特定tag成為可能，這些常用的tag包括myc、HA、Flag、His、GST等。帶上tag后，通常不會(huì)影響目標(biāo)蛋白的生物活性和細(xì)胞內(nèi)定位。但檢測(cè)和tag融合表達(dá)的目標(biāo)蛋白時(shí)，使用商業(yè)化的相應(yīng)tag抗體就可以完成，大大方便了很多實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。

應(yīng)用^[7][8]

HA抗體可以用于檢測(cè)和HA tag融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測(cè)HAtag融合表達(dá)蛋白等。

在抗禽流感病毒（AIV）血凝素（HA）單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株建立的研究中將低致病性H9N2亞型和H5N2亞型禽流感病毒經(jīng)著速離心和蔗糖密度梯度離心純化后，免疫Balb/c小鼠，應(yīng)用淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)，通過(guò)ELISA和HI篩選，建立了抗H5和H9N2亞型禽流感病毒雜交瘤細(xì)胞株3E4、2A4，其分泌抗體能力穩(wěn)定，為針對(duì)HA蛋白的單抗，3E4分泌的單克隆抗體能與H5N2亞型N28株發(fā)生血凝抑制反應(yīng)，不與H9N2亞型Hp株發(fā)生反應(yīng)：2A4與H9N2亞A／雞／河南／A2／99（H9N2）株、A／雞／淇縣／A1／01（H9N2）株、A／雞／淇縣／A1／04（H9N2）株AIV發(fā)生血凝抑制反應(yīng)，而不與H5N2亞型AIV發(fā)生反應(yīng)。

兩株單抗與H1N1、H3N2 SIV、NDV、IBDV、EDSV及IBV均無(wú)交叉反應(yīng)，表明該單抗分別具有AIV H5和H9亞型特異性。3E4雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清和腹水HI效價(jià)分別為5、7（log2），ELISA效價(jià)分別為6400和12800；2A4雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清和腹水HI效價(jià)為8 log2和16 log2，ELISA效價(jià)為12800和256000。這兩株雜交瘤細(xì)胞分泌的抗體均有良好的熱穩(wěn)定性。腹水經(jīng)辛酸硫酸銨純化后，蛋白含量分別7.46mg／mL、14.9 mg／mL。

此兩株單克隆抗體的獲得為禽流感病毒快速亞型鑒別檢測(cè)方法的建立，以及研究AIV H5亞型和H9亞型血凝素（HA）抗原性分析、變異規(guī)律和變異株的檢測(cè)等奠定了基礎(chǔ)。H9N2亞型AIV表面抗原上的具有血凝活性的抗體結(jié)合位點(diǎn)不止一個(gè)，3和18毒株的該位點(diǎn)已經(jīng)變異或缺失。四株單抗分別做病毒中和試驗(yàn)。發(fā)現(xiàn)均無(wú)中和活性，說(shuō)明表面抗原上的血凝活性位點(diǎn)并非就是中和活性位點(diǎn)。本試驗(yàn)的研究結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了H9N2亞型AIV血凝素抗原的變異特性，將為H9N2亞型AIV血凝素表面抗原結(jié)構(gòu)與功能及變異規(guī)律的深入研究以及我國(guó)的禽流感H9亞型的流行疫苗株的選擇提供了依據(jù)。

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