背景^[1-3]

大巴貝蟲PCR試劑盒是一種用于檢測大巴貝蟲的PCR試劑盒。大巴貝蟲是一種常見的寄生蟲，可以引起多種疾病，如瘧疾、巴貝斯蟲病等。該試劑盒包含以下主要成分：

PCR反應(yīng)液：包含聚合酶、dNTPs、引物等，用于擴(kuò)增大巴貝蟲的DNA。

陽性對照：含有已知的大巴貝蟲DNA，用于驗(yàn)證試劑盒的準(zhǔn)確性和可靠性。

陰性對照：不含大巴貝蟲DNA，用于排除假陽性結(jié)果。

樣品處理液：用于提取和處理樣品中的DNA。

緩沖液：用于調(diào)節(jié)PCR反應(yīng)液的pH值和離子強(qiáng)度。

其他輔助試劑：如Tris-HCl、EDTA、BSA等，用于調(diào)節(jié)反應(yīng)條件和提高反應(yīng)效率。

使用大巴貝蟲PCR試劑盒時(shí)，首先需要提取樣品中的DNA，然后將其加入到PCR反應(yīng)液中進(jìn)行擴(kuò)增。通過檢測擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性，可以確定樣品中是否存在大巴貝蟲的DNA。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，適用于臨床實(shí)驗(yàn)室和研究機(jī)構(gòu)對大巴貝蟲的快速檢測和鑒定。

大巴貝蟲PCR試劑盒

大巴貝蟲PCR試劑盒的操作步驟如下：

1.樣本采集：從患者體內(nèi)采集血液、糞便、組織等樣本，并將其保存在無菌容器中。

2.DNA提?。簩⒉杉降臉颖具M(jìn)行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取試劑盒。提取后的DNA應(yīng)保存在-20°C或更低的溫度下。

3.PCR反應(yīng)體系準(zhǔn)備：根據(jù)大巴貝蟲PCR試劑盒說明書的要求，配制PCR反應(yīng)體系，包括引物、熒光探針、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反應(yīng)：將提取的DNA加入到PCR反應(yīng)體系中，進(jìn)行PCR反應(yīng)。反應(yīng)條件和時(shí)間根據(jù)試劑盒說明書的要求進(jìn)行設(shè)置。

5.結(jié)果分析：將PCR反應(yīng)后的產(chǎn)物進(jìn)行熒光信號檢測，根據(jù)熒光信號的出現(xiàn)情況判斷是否存在大巴貝蟲的感染。

應(yīng)用^[4][5]

大巴貝蟲PCR試劑盒可以用于馬泰勒蟲分類學(xué)定位佐證及PCR、ELISA檢測方法的建立

研究用分離自我國的馬泰勒蟲和駑巴貝斯蟲進(jìn)行動物接種培養(yǎng),采集含蟲血,提取蟲體基因組DNA。并根據(jù)GenBank上報(bào)道的馬梨形蟲18S rRNA、馬泰勒蟲Hsp70和EMA1基因,設(shè)計(jì)引物,利用大巴貝蟲PCR試劑盒PCR方法分別獲得了相應(yīng)大小的核苷酸片段,將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆于pGEM-T easy載體,PCR鑒定陽性模板用于核苷酸序列測定。

大巴貝蟲PCR試劑盒結(jié)果顯示獲得的馬泰勒蟲18S rRNA核苷酸片段大小為913bp,駑巴貝斯蟲18S rRNA核苷酸片段大小為452bp,馬泰勒蟲Hsp70核苷酸片段大小為1920bp,EMA1核苷酸片段大小為819bp。利用以上序列分別建立物種間的種系發(fā)生樹,同時(shí)利用18S rRNA序列特征建立了馬泰勒蟲和駑巴貝斯蟲大巴貝蟲PCR試劑盒PCR診斷方法。利用EMA1基因建立了馬泰勒蟲ELISA診斷方法。18S rRNA作為分類學(xué)鑒定的標(biāo)志性基因序列,已經(jīng)在多個(gè)物種的分離鑒定中得應(yīng)用。本試驗(yàn)基于該基因的V4高變區(qū)對我國馬梨形蟲的分類學(xué)定位進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)之前稱為馬巴貝斯(Babesia equi)的蟲種和泰勒蟲種有著更為密切的關(guān)系,它們處于同一分支,而與巴貝斯蟲種處于明顯的兩個(gè)分支,這與之前將馬泰勒蟲定名為馬巴貝斯蟲的說法完全相悖。同時(shí)發(fā)現(xiàn)我國馬梨形蟲與西班牙馬梨形蟲親緣關(guān)系最近。為了進(jìn)一步驗(yàn)證這一結(jié)果,同時(shí)克隆了馬泰勒蟲的Hsp70基因,系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果與18S rRNA為基礎(chǔ)研究的結(jié)果是一致的。以上研究結(jié)果從不同角度佐證了我國馬泰勒蟲在國際分類學(xué)中的地位并從分子進(jìn)化角度詮釋了馬巴貝斯蟲(舊稱)隸屬于泰勒蟲科,泰勒蟲屬這一事實(shí),該種的正確命名應(yīng)為馬泰勒蟲。馬梨形蟲對我國乃至世界馬屬動物產(chǎn)業(yè)的發(fā)展有著極其嚴(yán)重的危害,而我國依然沒有自主知識產(chǎn)權(quán)的產(chǎn)品應(yīng)用于馬梨形蟲病的診斷。本試驗(yàn)利用獲得的馬梨形蟲18S rRNA建立了馬梨形蟲病的PCR診斷方法。

大巴貝蟲PCR試劑盒PCR結(jié)果顯示,利用馬泰勒蟲特異性引物檢測馬泰勒蟲、駑巴貝斯蟲、尤氏泰勒蟲、中華泰勒蟲、環(huán)形泰勒蟲、綿陽泰勒蟲、呂氏泰勒蟲、瑟氏泰勒蟲時(shí)僅有馬泰勒蟲模板檢測為陽性。而用駑巴貝斯蟲特異性引物檢測駑巴貝斯蟲、馬泰勒蟲、雙芽巴貝斯蟲、莫氏巴貝斯蟲、卵形巴貝斯蟲、大巴貝斯蟲時(shí)也僅有駑巴貝斯蟲模板及混合樣本為陽性,各自的引物分別對馬泰勒蟲或駑巴貝斯蟲沒有交叉反應(yīng)。敏感性試驗(yàn)中,對定量到100ng/ul馬梨形蟲基因組模板進(jìn)行擴(kuò)增顯示,馬泰勒蟲和駑巴貝斯蟲的檢出率分別為10-13、10-10。該方法和常規(guī)的顯微鏡鏡檢方法對54份田間樣品檢測結(jié)果表明,大巴貝蟲PCR試劑盒PCR方法比顯微鏡法檢測有著更高的檢出率。常規(guī)的分子診斷方法已經(jīng)不能滿足于大批量的田間樣品檢測的需求,因此尋找好的抗原建立血清學(xué)診斷方法就顯得尤為重要。

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