背景^[1-3]

RL95-2人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞是一種人源性腫瘤細(xì)胞系，來源于子宮內(nèi)膜癌患者的組織樣本。這種細(xì)胞系在實(shí)驗(yàn)室中廣泛用于研究子宮內(nèi)膜癌的生物學(xué)特性、藥物篩選和治療策略的開發(fā)。

RL95-2人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞具有以下特點(diǎn)：

形態(tài)特征：RL95-2人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞呈多邊形或長方形，具有豐富的胞質(zhì)和較大的核。

生長特性：RL95-2人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下生長迅速，具有較高的增殖能力。

遺傳特征：RL95-2人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞具有人類染色體的正常核型，但可能存在某些基因突變或表達(dá)異常。

藥物敏感性：RL95-2人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞對多種化療藥物(如順鉑、紫杉醇等)具有敏感性，可作為藥物篩選的模型細(xì)胞。

研究應(yīng)用：RL95-2人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞廣泛應(yīng)用于子宮內(nèi)膜癌的基礎(chǔ)研究，包括腫瘤發(fā)生機(jī)制、分子靶點(diǎn)研究、藥物篩選和治療策略評估等。

雖然RL95-2人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞具有一定的代表性，但仍存在局限性。因此，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究時(shí)，應(yīng)結(jié)合其他來源的細(xì)胞系和動(dòng)物模型，以獲得更全面的研究結(jié)果。

RL95-2人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞

RL95-2人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇RL95-2人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)RL95-2人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)RL95-2人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4][5]

RL95-2人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞可以用于短發(fā)夾狀RNA干擾對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中HMGB1基因表達(dá)及細(xì)胞增殖的影響

研究短發(fā)夾狀RNA(shRNA)干擾對RL95-2人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中HMGB1基因表達(dá)及細(xì)胞增殖的影響。

方法:觀察由HMGB1基因的shRNA真核表達(dá)質(zhì)粒pGPU6/GFP/Neo介導(dǎo)的HMGB1shRNA對RL95-2人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖的影響,將HMGB1基因的shRNA真核表達(dá)質(zhì)粒pGPU6-shRNA轉(zhuǎn)染人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系RL95-2細(xì)胞中。

實(shí)驗(yàn)分組如下:①實(shí)驗(yàn)組(RL95-2 HMGB1/p-shRNA)②空載體對照組(RL95-2/p)③轉(zhuǎn)染試劑對照組(RL95-2/mock-contr01)④陽性對照組(RL95-2GAPDH/p-shRNA)⑤陰性對照組(RL95-2 HMGB1/p-NC)⑥空白組(RL95-2人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞)。用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒后各組細(xì)胞的HMGB1mRNA的表達(dá)效應(yīng),Western-blot法檢測轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒后各組細(xì)胞的HMGB1蛋白水平的表達(dá),四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法檢測轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒后各組細(xì)胞的增殖狀況,每組重復(fù)試驗(yàn)5次,取3次結(jié)果計(jì)算,以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

結(jié)果:(1)重組質(zhì)粒pGPU6-HMGB1shRNA核酸序列分析結(jié)果顯示,靶向HMGB1基因的shRNA模板片段已經(jīng)插入到RNAi專用的pGPU6/GFP/Neo Express質(zhì)粒中,測序結(jié)果與設(shè)計(jì)完全一致。

(2)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后可見綠色熒光蛋白表達(dá)示轉(zhuǎn)染成功,且觀察到轉(zhuǎn)染率最高可達(dá)到(73.267±1.626)%。

(3)RT-PCR:將HMGB1 pGPU6-shRNA轉(zhuǎn)染RL95-2人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞后2d,實(shí)驗(yàn)組的HMGB1mRNA表達(dá)量是空白組的0.05倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2-ΔΔCt＜0.5),實(shí)驗(yàn)組和陽性對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,空載體對照組、轉(zhuǎn)染試劑對照組、陰性對照組和空白組兩兩相比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

(4)Western-blot法:將HMGB1pGPU6-shRNA轉(zhuǎn)染RL95-2人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞后2d,實(shí)驗(yàn)組的HMGB1蛋白相對表達(dá)量為0.153±0.004,與空白組的0.568±0.005相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);與陽性對照組的0.158±0.006相比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;空載體對照組、轉(zhuǎn)染試劑對照組、陰性對照組和空白組兩兩相比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

參考文獻(xiàn)

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