背景^[1-3]

油紅O染色液(細胞專用)（Oil Red O staining solution）是一種用于細胞和組織中脂質(zhì)沉積的特異性染色方法。它主要用于檢測脂肪滴、脂蛋白和其他含脂質(zhì)的結(jié)構(gòu)。在病理學和細胞生物學研究中，油紅O染色被廣泛應(yīng)用于評估細胞中的脂肪含量，特別是在研究動脈粥樣硬化、脂肪細胞分化和脂肪肝等疾病時。

油紅O染色液(細胞專用)

油紅O染色液(細胞專用)通常包含油紅O染料、異丙醇和水。染色過程通常包括以下步驟：

固定：首先，需要將細胞或組織樣本固定在載玻片上，以保持其結(jié)構(gòu)并防止樣品在染色過程中脫落。

染色：將油紅O染色液加到固定的細胞或組織樣本上，使其充分覆蓋。染色時間可能因樣本類型和所需染色強度而異。

分化：使用60%的異丙醇或其他適當?shù)娜芤簺_洗掉多余的染料，以便更清晰地觀察染色結(jié)果。

核染色：為了增強對比度，可以使用蘇木精或其他核染料對細胞核進行染色。

封片：最后，將蓋玻片放在染色后的樣本上，并用封片劑固定。

在使用油紅O染色液時，需要注意以下幾點：

油紅O染色液(細胞專用)應(yīng)在通風良好的環(huán)境中使用，并避免直接接觸皮膚和眼睛。

染色液的制備和使用應(yīng)嚴格按照制造商的說明進行。

染色時間和分化時間可能需要根據(jù)實驗?zāi)康暮蜆颖绢愋瓦M行調(diào)整。

油紅O染色的結(jié)果可以在光學顯微鏡下觀察，脂肪滴會呈現(xiàn)為紅色或橙紅色的顆粒。通過定量分析染色強度，可以對細胞中的脂肪含量進行估算。

應(yīng)用^[4][5]

油紅O染色液(細胞專用)可以用于糖腎方基于FXR通路調(diào)節(jié)脂代謝“肝腎同治”的作用機制研究

糖腎方對db/db小鼠核受體FXR通路介導腎臟脂質(zhì)沉積的調(diào)控機制研究。在實驗一的基礎(chǔ)上,取正常對照組db/m、模型對照組db/db、糖腎方治療組的小鼠腎臟皮質(zhì)。利用酶標比色法測定腎組織膽固醇以及甘油三酯水平。利用Filipin染色及油紅O染色液(細胞專用)染色,觀察糖腎方對db/db小鼠腎臟脂質(zhì)沉積的影響。利用Western Blotting,real-time PCR,免疫熒光等方法觀察糖腎方對小鼠腎臟皮質(zhì)FXR,FXR下游靶基因載脂蛋白E(apolipoprotein e,ApoE),以及FXR上游過氧化物酶體增殖物激活受體γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator 1α,PGC-1α)蛋白以及mRNA表達水平的影響。

實驗三:糖腎方對腎小管上皮細胞核受體FXR通路介導脂質(zhì)沉積的調(diào)控研究。利用棕櫚酸鈉刺激體外培養(yǎng)的腎小管上皮細胞(mTECs)模型,CCK8法檢測不同濃度糖腎方對mTECs細胞生長抑制率,篩選糖腎方有效濃度。使用Fillibin染色、油紅O染色液(細胞專用)染色以及酶標比色法測定糖腎方干預后mTECs細胞內(nèi)的膽固醇及甘油三酯含量變化,從而評估糖腎方對mTECs細胞脂質(zhì)沉積的影響。利用Western Blotting,real-time PCR等檢測糖腎方對PA刺激mTECs細胞內(nèi)ApoE,FXR,PGC-1α蛋白以及mRNA表達水平影響。糖腎方干預FXR-SiRNA轉(zhuǎn)染的mTECs細胞,探討糖腎方通過核受體FXR調(diào)節(jié)mTECs細胞脂代謝的分子機制。

糖腎方通過核受體FXR通路調(diào)節(jié)肝臟脂代謝機制研究。

(1) 實驗一:糖腎方對自發(fā)性2型糖尿病db/db小鼠肝損害的藥效學觀察。給予8周齡,雄性db/db小鼠以及同遺傳背景db/m小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)2周后,隨機分為正常對照組db/m,模型對照組db/db,糖腎方治療組:db/db+TSF(2.4 g/kg/d),陽性藥非諾貝特治療組:db/db+Fen(30mg/kg/d)。10周齡開始灌胃給藥,每周記錄動物體重1次,每三周尾尖采血測空腹血糖。給藥12周后在麻醉下心臟穿刺法取血,測定肝功能,血脂及血糖水平。同時,處死動物取肝組織,做生化、分子生物學及組織病理檢測,評估藥物對肝損傷的改善作用。

(2) 實驗二:糖腎方對db/db小鼠核受體FXR通路介導肝臟脂質(zhì)沉積的調(diào)控機制研究。在上一實驗的基礎(chǔ)上,取正常對照組db/m、模型對照組db/db、糖腎方治療組的小鼠肝組織,進行Filipin染色及油紅O染色液(細胞專用)染色,觀察糖腎方對db/db小鼠肝臟膽固醇及甘油三酯代謝影響。利用Western Blotting,real-time PCR等檢測糖腎方對各組小鼠肝臟FXR,FXR下游靶基因ApoE,以及FXR上游轉(zhuǎn)錄共激活因子PGC-1α蛋白以及mRNA表達水平影響。

(3)實驗三:糖腎方對小鼠肝細胞核受體FXR通路介導脂質(zhì)沉積的調(diào)控研究。給予棕櫚酸鈉刺激體外培養(yǎng)的小鼠源正常肝細胞(AML12)模型Fillibin染色和油紅O染色液(細胞專用)染色,測定糖腎方干預后AML12細胞內(nèi)的膽固醇及甘油三酯含量變化,從而評估糖腎方對AML12細胞脂質(zhì)沉積的影響。

參考文獻

[1]Carbohydrate and protein based biopolymeric nanoparticles:Current status and biotechnological applications[J].Madan L.Verma;;B.S.Dhanya;;Sukriti;;Varsha Rani;;Meenu Thakur;;J.Jeslin;;Rekha Kushwaha.International Journal of Biological Macromolecules,2020

[2]ApoE deficiency promotes non-alcoholic fatty liver disease in mice via impeding AMPK/mTOR mediated autophagy[J].Wanpeng Lu;;Jinyu Mei;;Juan Yang;;Zhihan Wu;;Jiayuan Liu;;Pengyu Miao;;Yiliang Chen;;Zhenfan Wen;;Zhongting Zhao;;Hua Kong;;Chao Wu;;Yan Yang;;Ming Chen.Life Sciences,2020

[3]The patatin-like phospholipase domain containing protein 7 facilitates VLDL secretion by modulating ApoE stability.[J].Wang Xiuyun;;Guo Min;;Wang Qian;;Wang Qingjie;;Zuo Shasha;;Zhang Xu;;Tong Hui;;Chen Jizheng;;Wang Huiming;;Chen Xiaowei;;Guo Junyuan;;Su Xiong;;Liang Hui;;Zhou Hongwen;;Li John Zhong.Hepatology(Baltimore,Md.),2020

[4]Role of farnesoid X receptor in hepatic steatosis in nonalcoholic fatty liver disease[J].Yingfei Xi;;Hongshan Li.Biomedicine&Pharmacotherapy,2020

[5]申正日.糖腎方基于FXR通路調(diào)節(jié)脂代謝“肝腎同治”的作用機制研究[D].北京中醫(yī)藥大學,2022.