背景^[1-3]

核蛋白提取試劑盒是一種用于從細(xì)胞中提取核蛋白的實(shí)驗(yàn)工具。核蛋白是指在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)合成，然后運(yùn)輸?shù)胶藘?nèi)起作用的一類蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)在細(xì)胞核中發(fā)揮著重要的功能，包括DNA復(fù)制、基因表達(dá)和細(xì)胞周期調(diào)控等。

核蛋白提取試劑盒是一種生物技術(shù)工具，主要用于從細(xì)胞或組織中分離和純化核蛋白。這種試劑盒的使用通常涉及簡單、逐步裂解細(xì)胞并離心分離細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)蛋白組分。例如，NE-PER試劑盒就提供了一種簡單、方便的從培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織中抽提核蛋白的方法，只需要約60分鐘就可以將核蛋白和漿蛋白從細(xì)胞中分離出來。另一個(gè)例子是細(xì)胞核蛋白質(zhì)提取試劑盒，其獨(dú)特組份能夠在非變性和低滲的條件下裂解細(xì)胞，經(jīng)過洗滌去除大部分胞質(zhì)蛋白和膜蛋白，釋放的細(xì)胞核能夠保持完整，再用Lysis Buffer對(duì)細(xì)胞核蛋白質(zhì)進(jìn)行抽提的同時(shí)可以保持核蛋白的活性。

使用核蛋白提取試劑盒提取的蛋白可以用于進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)，如免疫檢測(cè)以及蛋白相互作用實(shí)驗(yàn)，如遷移率變動(dòng)分析(EMSA)、免疫共沉淀(Co-IP)和沉淀分析。得到的蛋白也可以用于Western blot等實(shí)驗(yàn)。在提取的過程中，這些試劑盒的設(shè)計(jì)都盡可能地保持了核蛋白的活性并減少了膜和胞質(zhì)蛋白對(duì)核蛋白的污染。

核蛋白提取試劑盒

核蛋白提取試劑盒通常包含一系列的化學(xué)試劑和緩沖液，用于裂解細(xì)胞、分離細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，并從細(xì)胞核中提取出核蛋白。這些試劑盒一般具有操作簡便、快速、高效等特點(diǎn)，能夠提供高純度、高濃度的核蛋白樣品，用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)和分析。

核蛋白提取試劑盒的應(yīng)用范圍廣泛，可以用于各種不同類型的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，包括腫瘤細(xì)胞、干細(xì)胞、免疫細(xì)胞等。通過提取和分析核蛋白樣品，可以深入了解細(xì)胞的生物學(xué)特性和功能，為疾病診斷、藥物研發(fā)和再生醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域提供重要的支持。

需要注意的是，核蛋白提取試劑盒的使用方法可能因不同的實(shí)驗(yàn)需求和細(xì)胞類型而有所不同。因此，在使用核蛋白提取試劑盒時(shí)，應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，了解操作步驟和注意事項(xiàng)，并確保按照正確的操作方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。同時(shí)，也應(yīng)注意遵守實(shí)驗(yàn)室的安全規(guī)定，確保實(shí)驗(yàn)過程的安全性。

應(yīng)用^[4-5]

核蛋白提取試劑盒可以用于三種核蛋白提取方法應(yīng)用于雙向電泳的比較

隨著蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展,人們對(duì)蛋白組學(xué)的研究已經(jīng)深入到亞細(xì)胞水平,但是目前技術(shù)的分辨率對(duì)于全細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)的分析無法滿足人們的要求,于是亞細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)的提出是蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)展的必然結(jié)果。亞細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)不僅可以降低蛋白的復(fù)雜性,而且可以富集低豐度蛋白,提高低豐度蛋白的檢出率,有利于人們深入認(rèn)識(shí)生命本質(zhì)。細(xì)胞核蛋白質(zhì)組學(xué)是亞細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)的一部分,提取獲得純凈的細(xì)胞核蛋白有利于細(xì)胞核蛋白質(zhì)組學(xué)的研究。

比較三種不同的核蛋白提取試劑盒方法制備的核蛋白應(yīng)用于雙向電泳的可行性及效率。

方法1.分別應(yīng)用Dounce勻漿器研磨法、試劑盒提取法和渦旋破膜法提取HeLa細(xì)胞核蛋白；

2. Bradford法測(cè)定蛋白濃度；

3. Western blot檢測(cè)標(biāo)志性胞漿蛋白和核蛋白；

4. 雙向電泳后銀染掃描圖像,PDQuest8.0分析圖像。

結(jié)果渦旋法獲得核蛋白的過程所需時(shí)間最短；核蛋白提取試劑盒和渦旋法能夠較快速的獲得相對(duì)較純的核蛋白；Dounce勻漿法獲得的核蛋白量較少同時(shí)摻雜較多的胞漿蛋白。三種方法所獲得的核蛋白雙向電泳后其蛋白圖譜基本相似。

結(jié)論三種提取方法制備的核蛋白都可用于蛋白組學(xué)研究中的雙向電泳分析,但核蛋白提取試劑盒和渦旋法較Dounce法提取核蛋白純度及效率高,且渦旋法更快速、成本更低。

參考文獻(xiàn)

[1]Novel Stromal Biomarkers in Human Breast Cancer Tissues Provide Evidence for the More Malignant Phenotype of Estrogen Receptor-Negative Tumors[J].Zahraa I.Khamis;;Ziad J.Sahab;;Stephen W.Byers;;Qing-Xiang Amy Sang;;George E.Plopper.Journal of Biomedicine and Biotechnology,2011

[2]How microbial proteomics got started.[J].Neidhardt Frederick C.Proteomics,2011

[3]Binding of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase to the cis-acting element of structure-anchored repression in ccn2 mRNA[J].Seiji Kondo;;Satoshi Kubota;;Yoshiki Mukudai;;Takashi Nishida;;Yasuto Yoshihama;;Tatsuo Shirota;;Satoru Shintani;;Masaharu Takigawa.Biochemical and Biophysical Research Communications,2011(3)

[4]Proteomic alterations of distinct mitochondrial subpopulations in the type 1 diabetic heart:contribution of protein import dysfunction.[J].Baseler Walter A;;Dabkowski Erinne R;;Williamson Courtney L;;Croston Tara L;;Thapa Dharendra;;Powell Matthew J;;Razunguzwa Trust T;;Hollander John M.American journal of physiology.Regulatory,integrative and comparative physiology,2011

[5]李煥榕.三種核蛋白提取方法應(yīng)用于雙向電泳的比較[D].浙江大學(xué),2013.