背景[1-3]
雞痘病毒PCR試劑盒是一種用于檢測雞痘病毒的實(shí)驗(yàn)工具，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)進(jìn)行檢測。該試劑盒具有高靈敏度和特異性，能夠快速、準(zhǔn)確地檢測出雞痘病毒，對(duì)于該病的診斷和治療具有重要意義。
雞痘病毒是一種DNA病毒，主要引起雞的皮膚和黏膜疾病，表現(xiàn)為皮膚出現(xiàn)結(jié)節(jié)和雞冠、肉髯等部位出現(xiàn)痘疹。雞痘病毒通常通過直接接觸病雞或接觸污染的環(huán)境而傳播，潛伏期一般為4-6天。感染雞痘病毒的雞會(huì)出現(xiàn)食欲不振、精神萎靡、體重下降等癥狀，嚴(yán)重時(shí)可能導(dǎo)致死亡。因此，對(duì)雞痘病毒進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的檢測對(duì)于控制該病的傳播和預(yù)防具有重要意義。
雞痘病毒PCR試劑盒的組成通常包括一對(duì)引物、Taq DNA聚合酶、dNTPs等必要的PCR反應(yīng)成分，以及可能包含的各種成分如染料、緩沖液、特異性結(jié)合探針等。引物是PCR反應(yīng)的關(guān)鍵成分，它們與雞痘病毒基因的特定區(qū)域結(jié)合，從而啟動(dòng)DNA的擴(kuò)增過程。Taq DNA聚合酶是一種耐熱的DNA聚合酶，能夠催化DNA的合成。dNTPs是合成DNA的基本原料。
使用雞痘病毒PCR試劑盒進(jìn)行檢測時(shí)，首先需要采集感染雞痘病毒的樣本，如病變部位的組織或病變部位的滲出物等。將樣本中的DNA與試劑盒中的引物和Taq DNA聚合酶等成分混合，進(jìn)行PCR反應(yīng)。反應(yīng)過程中，DNA會(huì)不斷擴(kuò)增，最終形成大量的特定基因片段。通過凝膠電泳等技術(shù)對(duì)這些片段進(jìn)行分析，可以判斷出是否存在雞痘病毒基因，從而確定雞是否感染該病原體。
雞痘病毒PCR試劑盒
雞痘病毒PCR試劑盒的操作步驟如下：
1.樣本采集：從患者體內(nèi)采集血液、糞便、組織等樣本，并將其保存在無菌容器中。
2.DNA提?。簩⒉杉降臉颖具M(jìn)行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取試劑盒。提取后的DNA應(yīng)保存在-20°C或更低的溫度下。
3.PCR反應(yīng)體系準(zhǔn)備：根據(jù)雞痘病毒PCR試劑盒的要求，配制PCR反應(yīng)體系，包括引物、熒光探針、dNTPs、DNA聚合酶等。
4.PCR反應(yīng)：將提取的DNA加入到PCR反應(yīng)體系中，進(jìn)行PCR反應(yīng)。反應(yīng)條件和時(shí)間根據(jù)試劑盒說明書的要求進(jìn)行設(shè)置。
5.結(jié)果分析：將PCR反應(yīng)后的產(chǎn)物進(jìn)行熒光信號(hào)檢測，根據(jù)熒光信號(hào)的出現(xiàn)情況判斷是否存在雞痘病毒的感染。
應(yīng)用[4-5]
雞痘病毒PCR試劑盒可以用于雞痘病毒地方分離株的鑒定及致病性研究
為了探討雞痘病毒是否發(fā)生了變異,同時(shí)建立比傳統(tǒng)的血清學(xué)方法更敏感、特異的分子生物學(xué)檢測方法,我們進(jìn)行了雞痘病毒分子遺傳學(xué)分析及PCR診斷方法的研究。本試驗(yàn)對(duì)臨床疑似雞痘的患雞,進(jìn)行了病毒的分離、提純、鑒定、序列分析,建立了對(duì)雞痘病毒的雞痘病毒PCR試劑盒PCR檢測方法,并進(jìn)行了初步應(yīng)用。
本試驗(yàn)首先對(duì)5例疑為皮膚型雞痘的病雞進(jìn)行了取樣及病毒的分離與鑒定。利用10日齡雞胚尿囊膜連續(xù)傳代3次,經(jīng)病毒分離、病毒致病變效應(yīng)(CPE)、瓊脂擴(kuò)散反應(yīng)等,證明所分離的病毒是雞痘病毒,命名為FPVSD1～5。根據(jù)已經(jīng)發(fā)表的雞痘病毒的C型血凝素基因序列,自行設(shè)計(jì)引物,FPVSD1～5分離株通過雞痘病毒PCR試劑盒PCR分別擴(kuò)增出了預(yù)期的647bp片段,經(jīng)過測序、序列比較分析對(duì)該基因序列的變異性研究表明:該序列與已經(jīng)發(fā)表的雞痘基因序列同源性高達(dá)100%,沒有發(fā)生基因變異。
又根據(jù)雞痘病毒Hypothetical protein基因序列,設(shè)計(jì)另外一對(duì)引物,通過雞痘病毒PCR試劑盒PCR擴(kuò)增出了預(yù)期的704bp片段,經(jīng)過測序、序列比較分析對(duì)該基因序列的變異性研究表明:該序列與已經(jīng)發(fā)表的雞痘基因序列同源性高達(dá)100%,也沒有發(fā)生基因變異。再次證明雞痘病毒基因組保守性較高。利用分離的地方株雞痘病毒對(duì)SPF雛雞和商品代蛋公雛雞進(jìn)行了攻毒實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明:實(shí)驗(yàn)雞群并未發(fā)生嚴(yán)重的雞痘癥狀和病理變化。上述實(shí)驗(yàn)建立的雞痘病毒PCR試劑盒PCR方法,同時(shí)可用于雞痘病毒的分子生物學(xué)診斷。
參考文獻(xiàn)
[1]Maternal antibody to infectious bronchitis virus:its role in protection against infection and development of active immunity to vaccine[J].S.P Mondal;;S.A Naqi.Veterinary Immunology and Immunopathology,2001(1)
[2]A Recombinant Fowlpox Virus Expressing the Envelope Antigen of Subgroup A Avian Leukosis/Sarcoma Virus[J]..Avian Diseases,1995(3)
[3]Infectious bursal disease virus structural protein VP 2 expressed by a fowlpox virus recombinant confers protection against disease in chickens[J].H.-G.Heine;;D.B.Boyle.Archives of Virology,1993(3)
[4]Antibody Response to Newcastle Disease Virus(NDV)of Recombinant Fowlpox Virus(FPV)Expressing a Hemagglutinin-Neuraminidase of NDV into Chickens in the Presence of Antibody to NDV or FPV[J]..Avian Diseases,1991(4)
[5]邵二波.雞痘病毒地方分離株的鑒定及致病性研究[D].山東農(nóng)業(yè)大學(xué),2009.