背景及概述[1][2]
甲苯胺蘭又稱甲苯胺藍(lán)；2,2'-[(9,10-二氫-4,8-二羥基-9,10-二氧代-1,5-蒽二基)二亞氨基]雙(5-甲基苯磺酸)二鈉鹽；甲苯胺蘭/甲苯胺蘭；甲苯胺蘭O。
甲苯胺蘭為光敏劑凝膠，具有以下幾大優(yōu)勢：凝膠制劑具有一定的粘性和附著性，可以使藥物停留在患病部位提高治療效果。另一方面甲苯胺蘭是一種核酸傾向的嗜酸性染料，停留在細(xì)胞核成分較多的組織中。在組織中具有較好的穿透深度，可有效的分布于感染的靶組織，但不能穿透正常組織，這樣避免了正常組織受到光動力對其的殺傷，所以甲苯胺蘭對病變區(qū)域、細(xì)菌具有較好的選擇性。最重要的一點(diǎn)是，甲苯胺蘭光敏劑無明顯的毒副作用，這樣減少了對人類健康系統(tǒng)的危害，有利于光動力療法的推廣與應(yīng)用。
甲苯胺蘭
應(yīng)用[3]
胸腹水、婦科脫落細(xì)胞多功能快速染液
染液的組成：
配方：成份硫堇、甲苯胺蘭、磷酸三鈉、水
比例為 1∶2∶1∶10
配制法：將硫堇、甲苯胺蘭與水混合后，充分搖勻然后再加入磷酸三鈉混合并將染液過濾即可。
使用方式：對各種脫落細(xì)胞涂片待其略干后滴上此染液3-4滴充分覆蓋涂片膜面，約30秒到1分種后用其流水沖洗即可濕片鏡檢。需油鏡觀察者待涂片干后加香柏油鏡檢。
優(yōu)點(diǎn)：與傳統(tǒng)的格蘭氏、瑞氏染液及現(xiàn)有的婦科白帶涂片多功能染色液檢測試劑相比其優(yōu)點(diǎn)如下：
一是同一張涂片本染液所染細(xì)胞背景十分清晰，細(xì)胞核、漿一次染成，并紅藍(lán)分明，各種被染的脫落細(xì)胞、細(xì)菌、真菌顏色鮮亮形態(tài)清晰，形似一張彩色圖片；而用傳統(tǒng)的染色液出的背景多不清晰，核、漿模糊不清及染色程序復(fù)雜；不論是傳統(tǒng)的染色液還是婦科白帶涂片多功能染色液，它們均是核、漿必須分兩次染色；次先將核染色后、第二次才能將漿染出色；且不能一液多用。
二是同一患者、同一涂片用本染液染色出的陽性率高于傳統(tǒng)染色液染出陽性率60％；高于婦科白帶涂片多功能染色液染出的26％；
制備[2]
1.吲達(dá)胺的合成
在圓底燒瓶中將5g二鹽酸N，N-二甲基對苯二胺粉末加入到155g的USP(美國藥典)純水中，并在300rpm下攪拌。該N，N-二甲基對苯二胺反應(yīng)混合物20應(yīng)維持≤10℃，攪拌10分鐘。
通過將6.3g鹽酸(6N)緩慢加入到2.8g的鄰甲苯胺中來制備鹽酸鄰甲苯胺。鹽酸鄰甲苯胺溶液22應(yīng)攪拌至澄清，如果出現(xiàn)晶體，應(yīng)加入最少量的USP純水以將鹽酸鄰甲苯胺晶體再溶解。
將鹽酸鄰甲苯胺溶液22加入至二鹽酸N，N-二甲基對苯二胺反應(yīng)混合物20中，隨后再加入2g HCl(6N)24。反應(yīng)混合物應(yīng)維持在低于約10℃，并在冰浴上攪拌45分鐘。
使用滴液漏斗將29.25g重鉻酸鹽溶液28緩慢(超過20分鐘)滴加到鹽酸鄰甲苯胺和二鹽酸N，N-二甲基對苯二胺的反應(yīng)混合物26中，所述重鉻酸鹽溶液28通過將9.39g重鉻酸鉀加入到108g的USP純水中制備。一旦重鉻酸鹽溶液28已全部添加完畢，應(yīng)將二鹽酸吲達(dá)胺反應(yīng)混合物30維持在低于約10℃，并在冰浴上攪拌60分鐘。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，反應(yīng)混合物包括二鹽酸吲達(dá)胺及其衍生物。
2.S-吲達(dá)胺基硫代硫酸根的合成
通過將8.75g十六水合硫酸鋁加入至15g的USP純水中來制備硫酸鋁溶液32，進(jìn)而得到酸。將該酸添加到二鹽酸吲達(dá)胺反應(yīng)混合物30中并攪拌10分鐘。除了十六水合硫酸鋁以外的酸也是適合的。
通過將12.22g氯化鋅加入至15g的USP純水中來制備氯化鋅溶液34，進(jìn)而利用氯化鋅溶液34得到絡(luò)合劑。將該絡(luò)合劑添加到二鹽酸吲達(dá)胺反應(yīng)混合物30中并攪拌10分鐘。應(yīng)當(dāng)理解，雖然所述優(yōu)選實(shí)施方式包括氯化鋅，但其它絡(luò)合劑也是適合的，并包含在本發(fā)明中。
通過將9.39g重鉻酸鉀加入到108g的USP純水中制備重鉻酸鹽溶液36，進(jìn)而通過準(zhǔn)備29.25g的該重鉻酸鹽溶液36而得到氧化劑。用滴液漏斗將該氧化劑緩慢(超過20分鐘)加入至二鹽酸吲達(dá)胺反應(yīng)混合物30中，并在冰浴上攪拌20分鐘。
通過將6.53g五水合硫代硫酸鈉加入到15g的USP純水來制備硫代硫酸鈉溶液38，進(jìn)而得到含硫親核試劑源。將該含硫親核試劑源緩慢加入到二鹽酸吲達(dá)胺反應(yīng)混合物30中，并在冰浴上攪拌60分鐘。所形成的沉淀含有S-吲達(dá)胺基硫代硫酸根40及其衍生物。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，也可用其他的含硫親核試劑源來代替硫代硫酸鈉溶液38。
3.甲苯胺蘭和甲苯胺蘭鋅復(fù)鹽的合成
將S-吲達(dá)胺基硫代硫酸根40維持在10℃以下。用滴液漏斗將氧化劑緩慢(超過20分鐘)加入S-吲達(dá)胺基硫代硫酸根40中，并攪拌20分鐘。目前相信，29.25g的重鉻酸鹽溶液42適合于用作氧化劑。
向經(jīng)氧化的S-吲達(dá)胺基硫代硫酸根反應(yīng)混合物44中加入絡(luò)合劑，優(yōu)選加入27.0g的氯化鋅溶液46，并攪拌5分鐘，所述氯化鋅溶液46通過將12.22g氯化鋅加入到15g的USP純水中制備。加入氧化催化劑，優(yōu)選為17.3g的硫酸銅溶液48，并攪拌5分鐘，所述硫酸銅溶液48通過將2.38g硫酸銅加入到15g的USP純水中制備。
將溫度設(shè)定點(diǎn)變?yōu)?0℃。一旦反應(yīng)達(dá)到60℃，加入酸，將pH值降到2.9，所述酸優(yōu)選為硫酸溶液50(9N)。每次加酸后攪拌5分鐘。將溫度設(shè)定點(diǎn)變?yōu)?7℃。一旦反應(yīng)混合物達(dá)到97℃，攪拌35分鐘。將反應(yīng)混合物52緩慢冷卻至室溫。達(dá)到室溫后，將含有粗甲苯胺蘭產(chǎn)物混合物54的產(chǎn)物放入5℃冷卻器中。保存5～15小時(shí)。取出，并將部分粗甲苯胺蘭產(chǎn)物混合物54通過0.45μm的過濾器過濾。將經(jīng)過濾的溶液放入小瓶中以通過RP-HPLC(反相高效液相色譜)甲苯胺蘭分析方法進(jìn)行分析。
主要參考資料
[1] 褚慶輝. (1997). 甲苯胺蘭的電化學(xué)行為. 分析化學(xué)(7), 829-831.
[2] 達(dá)古拉, 曹高娃, & 張力. (2004). 甲苯胺蘭褪色光度法測定cr(Ⅵ). 內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 19(5), 516-517.
[3] 梁銳. (2006). 用甲苯胺蘭染液做宮頸涂片染色. 山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 7(1), 27-27.