通用細(xì)胞凍存液簡(jiǎn)介^[1-3]

通用細(xì)胞凍存液以進(jìn)口FBS、DMSO為主要原材料配制，適用于是各種哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞，傳代細(xì)胞系和雜交瘤細(xì)胞等的凍存保種。本產(chǎn)品為即用型試劑，儲(chǔ)存穩(wěn)定，使用方便，細(xì)胞存活率高。

細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來購(gòu)買、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞。細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點(diǎn)降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細(xì)胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細(xì)胞損傷。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細(xì)胞存活。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為-1到-2℃/min，當(dāng)溫度低于-25℃時(shí)可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。

通用細(xì)胞凍存液

細(xì)胞凍存原理：

細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以限度的保存細(xì)胞活力。如今細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。

通用細(xì)胞凍存液的使用方法同其他細(xì)胞凍存液基本一致，原則上細(xì)胞每支安瓿含1-10×106/ml。

消化到位的貼壁細(xì)胞，或最后一次離心后棄掉上清液，加入細(xì)胞凍存液，重懸、吹散沉淀的細(xì)胞，分裝入細(xì)胞凍存管，密封標(biāo)記后按常規(guī)操作流程依次經(jīng)4℃，-20℃，-80℃直至液氮罐或用程序降溫儀逐級(jí)降溫凍存。

通用細(xì)胞凍存液優(yōu)點(diǎn)如下：

1、減少基因漂移；

2、減緩細(xì)胞系的衰老；

3、穩(wěn)定表型；

4、減少微生物污染及交叉污染機(jī)會(huì)等。

細(xì)胞冷凍的原理在于盡可能降低細(xì)胞內(nèi)的晶體形成，減少細(xì)胞內(nèi)水凝固所形成的高濃度溶質(zhì)對(duì)細(xì)胞造成的低溫?fù)p傷，從提高細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)的存活率。細(xì)胞凍存的數(shù)量應(yīng)保證復(fù)蘇時(shí)低溫保護(hù)劑獲得1:10～1:20的稀釋，稀釋后的細(xì)胞濃度扔高于正常傳代的細(xì)胞濃度為宜，這是因?yàn)楫?dāng)?shù)蜏乇Ｗo(hù)劑稀釋10～20倍以后，該濃度一般不會(huì)對(duì)細(xì)胞造成毒性損傷。

通用細(xì)胞凍存液操作步驟:

1、培養(yǎng)細(xì)胞至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)晚期,顯微鏡觀察其外觀、形態(tài)、有無污染等,取狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行凍存操作。如為貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞,用胰蛋白酶消化并用完全培養(yǎng)基終止消化,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù);如為懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2、500~1000g離心5min,棄上清。

3、加入適量的通用細(xì)胞凍存液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1~10×106/ml,置于凍存管中,密閉、不要擰的太緊,避免彎曲變形。

4、一般遵循1℃/min的速率進(jìn)行冷凍。亦可采用4℃20min,-20℃30min,-70℃過夜,置于液氮罐中長(zhǎng)期存儲(chǔ)。

細(xì)胞凍存管融化

1.將細(xì)胞凍存管取出，浸入37℃水浴鍋內(nèi)，輕輕晃動(dòng)，注意融化，當(dāng)融得只剩一個(gè)小冰塊時(shí)，將細(xì)胞插入冰中。

2.加入4℃預(yù)冷的培養(yǎng)基，用手指輕彈懸浮細(xì)胞團(tuán)。

3.250g離心10min，去除上清液，再加入培養(yǎng)基，輕輕懸浮。

4. 盡量將細(xì)胞中的DMSO洗去，計(jì)數(shù)。

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