背景[1-3]
小鼠白介素2 ELISA試劑盒用于測定人血清、血漿、組織及相關液體樣本中白介素2的含量或活性。
實驗原理：
小鼠白介素2 ELISA試劑盒是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（elisa）。往預先包被小鼠白介素2(IL-2)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠白介素2(IL-2)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。
小鼠白介素2 ELISA試劑盒
標本要求
1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。
2.血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
操作步驟:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
應用[4][5]
用于雷帕霉素聯(lián)合調節(jié)性T細胞對受體小鼠移植心臟及抗腫瘤免疫的影響研究
研究短期使用雷帕霉素聯(lián)合調節(jié)性T細胞（regulatory T cell,Treg）在誘導同種異體小鼠心臟移植物長期存活,同時探討此方案對移植受體腫瘤免疫的影響。
方法：免疫磁珠法分離得到受體小鼠脾臟Treg,經CD3/CD28單克隆抗體磁珠及2000 U/mL重組小鼠白介素2（recombinant murine IL-2,rmIL-2）體外擴增后,流式細胞術檢測純度;建立小鼠腹腔同種異體心臟移植模型（H-2b到H-2d）,分為對照組（單純移植）、雷帕霉素組、雷帕霉素聯(lián)合Treg組。雷帕霉素組連續(xù)14 d經腹腔注射雷帕霉素1mg/（kg·d）,雷帕霉素聯(lián)合Treg組注射相同劑量的雷帕霉素,并于移植當天經尾靜脈過繼輸注擴增后的Treg（1×107/只）,同時設同基因移植組（H-2d到H-2d）,每日觀察移植心臟搏動并在相應時點進行組織學評價。
在受體腫瘤免疫實驗中設三組同種異體心臟移植（H-2b到H-2d）,同時經尾靜脈過繼輸注B16-F10細胞（H-2b）（供體來源）,另三組同種異體心臟移植（H-2d到H-2b）小鼠經尾靜脈過繼輸注B16-F10細胞（H-2b）（受體來源）,兩周后比較肺部腫瘤結節(jié)數(shù)量。結果CD4+CD25+Foxp3+Treg擴增前純度為86.68%±0.02%（n=5）,體外加入擴增2周后Treg數(shù)量達到了初始數(shù)量的3040倍,流式細胞術檢測CD4+CD25+Foxp3+Treg純度為84.58%±0.03%,與擴增前相比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
對照組移植心臟中位生存時間（MST）為7 d,雷帕霉素組為15 d,雷帕霉素聯(lián)合Treg過繼輸注能夠顯著延長移植心臟MST至93 d,組織學顯示長期存活心臟淋巴細胞浸潤及慢性血管病變;對于供體來源腫瘤,對照組未見腫瘤結節(jié),雷帕霉素組為（15±8）個,雷帕霉素聯(lián)合Treg組小鼠肺部腫瘤結節(jié)為（14±7）個,后2組類似無顯著性差異;對于受體來源腫瘤,對照組腫瘤結節(jié)為（70±12）個、雷帕霉素組為（28±9）個、雷帕霉素聯(lián)合Treg組小鼠肺部腫瘤結節(jié)為（146±12）個,與對照組、雷帕霉素組相比均顯著增加。結論短期使用低劑量雷帕霉素聯(lián)合Treg能夠顯著延長小鼠移植心臟的存活時間,但仍不能抑制受體腫瘤的發(fā)生。
參考文獻
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[2]Therapy of type 1 diabetes with CD4+CD25 high CD127-regulatory T cells prolongs survival of pancreatic islets—Results of one year follow-up[J].Natalia Marek-Trzonkowska,Ma?gorzata My?liwiec,Anita Dobyszuk,Marcelina Grabowska,Ilona Derkowska,Jolanta Ju?cińska,Rados?aw Owczuk,Agnieszka Szadkowska,Piotr Witkowski,Wojciech M?ynarski,Przemys?awa Jarosz-Chobot,Artur Bossowski,Janusz Siebert,Piotr Trzonkowski.Clinical Immunology.2014(1)
[3]Attenuation of Donor‐Reactive T Cells Allows Effective Control of Allograft Rejection Using Regulatory T Cell Therapy[J].K.Lee,V.Nguyen,K.‐M.Lee,S.‐M.Kang,Q.Tang.American Journal of Transplantation.2014(1)
[4]Clinical application of regulatory T cells in type 1 diabetes[J].Natalia Marek‐Trzonkowska,Ma?gorzata My?liwec,Janusz Siebert,Piotr Trzonkowski.Pediatr Diabetes.2013(5)
[5]閆挺.雷帕霉素聯(lián)合調節(jié)性T細胞對受體小鼠移植心臟及抗腫瘤免疫的影響[D].重慶醫(yī)科大學,2017.