背景[1-3]
蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒綜合了多種經(jīng)典的HE染色方法，例如Harris法、Mayer法等，簡(jiǎn)化了操作步驟，縮短了操作時(shí)間，并且染色液內(nèi)不使用汞、甲醇等有毒試劑?？梢杂糜诮M織切片或培養(yǎng)細(xì)胞的染色。
蘇木素染色(hematoxylin staining or haematoxylin staining)，也被稱(chēng)作蘇木精染色，是最常用的組織和細(xì)胞的染色方法之一。無(wú)色的蘇木素(hematoxylin)氧化后形成有醌環(huán)結(jié)構(gòu)(quinoid ring)的氧化蘇木素(hematein or haematein)，從而可以和三價(jià)的鋁離子、鐵離子等形成有顏色的帶正電荷的復(fù)合物(如hematein-Al3+complexes)。
氧化蘇木素(也稱(chēng)氧化蘇木精)和鋁離子等形成有色的復(fù)合物的過(guò)程也被稱(chēng)為Dye Lake Formation。細(xì)胞核內(nèi)基因組DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，雙鏈上的磷酸基團(tuán)向外，帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的氧化蘇木素復(fù)合物結(jié)合，從而形成細(xì)胞核染色。蘇木素染色液有多種不同的配制方法，不同的方法可以把細(xì)胞核染色成不同深淺的藍(lán)色或藍(lán)紫色。
伊紅(eosin)是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中解離成帶負(fù)電荷的陰離子，可以和蛋白質(zhì)氨基上帶正電荷的陽(yáng)離子結(jié)合，從而使細(xì)胞胞漿染成不同程度的紅色或粉紅色，與蘇木素染色液染色形成的藍(lán)色細(xì)胞核形成鮮明對(duì)比，從而使蘇木素伊紅(HE)染色成為病理組織切片中最廣泛使用的一種常規(guī)染色方法。
蘇木素伊紅染色后細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，細(xì)胞漿呈現(xiàn)粉紅色或紅色。
應(yīng)用[4][5]
用于瞬時(shí)受體電位M7通道在喉癌及癌旁組織表達(dá)差異的初步研究
目前TRPM7通道在人類(lèi)喉惡性腫瘤的作用鮮有報(bào)道,運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)喉癌組織及癌旁正常黏膜組織TRPM7通道的表達(dá)水平,并對(duì)其表達(dá)的差異性進(jìn)行研究分析；探討TRPM7通道在喉癌的病理分型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等組間的表達(dá)有無(wú)差異性,期望為喉鱗狀細(xì)胞癌的臨床診斷、靶向治療及預(yù)后評(píng)估提供新穎的理論及實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
方法1、標(biāo)本的收集（1）石蠟標(biāo)本篩選2013年1月至2013年10月于廣東省人民醫(yī)院診斷為喉鱗狀細(xì)胞癌患者的石蠟組織標(biāo)本,符合要求者共計(jì)18例。組織10%中性甲醛固定后,由我院病理科石蠟包埋,行蘇木素-伊紅染色病理確診。
（2）冰凍標(biāo)本收集2013年11月至2014年2月于我院診斷為原發(fā)性喉鱗狀細(xì)胞癌的患者13例,標(biāo)本離體后收集癌組織及癌周正常組織,保存于無(wú)Rnase離心管中,液氮運(yùn)輸,-80-C超低溫冰箱凍存。癌旁正常組織標(biāo)本經(jīng)HE染色證實(shí)未見(jiàn)癌細(xì)胞浸潤(rùn)。
（3）入組患者均符合以下要求：①患者均為原發(fā)性喉癌,且全身無(wú)轉(zhuǎn)移及未曾罹患其他惡性腫瘤,術(shù)后病理玻片經(jīng)HE染色示鱗狀細(xì)胞癌,癌旁正常黏膜組織可見(jiàn)排列整齊的復(fù)層鱗狀細(xì)胞；②所有患者術(shù)前均未接受放射治療或化學(xué)治療；③患者入院均行開(kāi)放性手術(shù)治療；④癌組織標(biāo)本行蘇木素-伊紅染色（HE染色）提示鱗狀細(xì)胞癌,癌旁組織均可見(jiàn)正常鱗狀上皮細(xì)胞。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往有癌癥史的患者或曾接受放療、化療或行同位素治療的患者均不納入研究范圍。
2、免疫組織化學(xué)染色石蠟切片經(jīng)S-P免疫組化法染色后,光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察顯色結(jié)果。采用Bresalier半定量公式判斷染色結(jié)果,對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行半定量分析：將免疫染色玻片在10倍物鏡視野下觀(guān)察,隨機(jī)選取5個(gè)視野,并記錄其染色強(qiáng)度,根據(jù)染色強(qiáng)度分為四級(jí),并分別計(jì)分：細(xì)胞無(wú)著色,陰性（0分）；細(xì)胞染色為淺黃色,弱陽(yáng)性（1分）；細(xì)胞著色為棕黃色,陽(yáng)性（2分）；細(xì)胞著色為棕褐色,強(qiáng)陽(yáng)性（3分）,計(jì)算每一強(qiáng)度的視野數(shù),根據(jù)公式：染色強(qiáng)度=∑｛（0xF0）+（1×F1）+（2×F2）+（3xFi）),Fi=%10×視野數(shù)（i=0,1,2,3）計(jì)算每張玻片的染色強(qiáng)度。
參考文獻(xiàn)
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[5]任曉彤.瞬時(shí)受體電位M7通道在喉癌及癌旁組織表達(dá)差異的初步研究[D].南方醫(yī)科大學(xué),2014.