背景及概述^[1]

(2E)-N-[4-(1-苯甲?；?4-哌啶基)丁基]-3-(3-吡啶基)-2-丙烯酰胺的研發(fā)代號(hào)為FK866，是一種煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶抑制劑(nMPRTase抑制劑)，IC50值為0.09nM。

生物活性研究^[1-3]

侵襲、轉(zhuǎn)移是肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)最主要的特征,而上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)在HCC的侵襲、轉(zhuǎn)移過(guò)程扮演重要角色。因此,尋找抑制EMT的靶向藥物成為目前研究的熱點(diǎn)。目前研究發(fā)現(xiàn)小分子藥物煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(nicotinamide phosphoribosyl transferase,NAMPT)抑制劑——(2E)-N-[4-(1-苯甲?；?4-哌啶基)丁基]-3-(3-吡啶基)-2-丙烯酰胺（FK866）可抑制肝癌細(xì)胞的活性,但其在肝癌中是否能抑制EMT過(guò)程,從而抑制肝癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移及可能的機(jī)制目前尚不清楚。濟(jì)南大學(xué)張斌通過(guò)小分子靶向藥物FK866處理肝癌MHCC97-H細(xì)胞,觀察細(xì)胞功能的變化,探討FK866對(duì)人肝癌MHCC97-H細(xì)胞活性、EMT過(guò)程的影響及可能作用的機(jī)制。方法:將人肝癌MHCC97-H細(xì)胞在體外用不同濃度FK866處理后,分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。通過(guò)CCK8實(shí)驗(yàn),觀察FK866處理細(xì)胞24h、48h、72h后細(xì)胞活性的變化情況;檢測(cè)FK866處理MHCC97-H細(xì)胞后NAD~+、ATP含量變化;通過(guò)劃痕愈合實(shí)驗(yàn)、Transwell小室實(shí)驗(yàn)分別觀察MHCC97-H細(xì)胞經(jīng)FK866處理后細(xì)胞遷移、侵襲能力的變化情況;然后通過(guò)Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)FK866處理MHCC97-H細(xì)胞后細(xì)胞SIRT1及EMT標(biāo)志蛋白Vimentin、E-Cadherin的表達(dá)情況。結(jié)果:CCK8細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示FK866呈濃度依賴性抑制肝癌MHCC97-H細(xì)胞活性(P<0.05);NAD~+、ATP含量檢測(cè)結(jié)果顯示,FK866呈濃度依賴性降低MHCC97-H細(xì)胞的NAD~+、ATP含量(P<0.05);細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)、Transwell小室遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,FK866呈濃度依賴性地抑制肝癌MHCC97-H細(xì)胞的遷移和侵襲能力(P<0.05);Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SIRT1和EMT標(biāo)志蛋白(Vimentin、E-Cadherin)的表達(dá)情況,結(jié)果顯示FK866能顯著降低SIRT1、Vimentin的表達(dá),上調(diào)E-Cadherin的表達(dá)(P<0.05)。結(jié)論:1.FK866可以抑制肝癌MHCC97-H細(xì)胞的活性,降低細(xì)胞內(nèi)NAD~+、ATP的含量。2.FK866能夠抑制肝癌MHCC97-H細(xì)胞遷移、侵襲能力。3.FK866通過(guò)抑制NAMPT/NAD~+/SIRT1通路,上調(diào)E-Cadherin,下調(diào)Vimentin,逆轉(zhuǎn)肝癌細(xì)胞EMT進(jìn)程進(jìn)而抑制肝癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移。

李清梅等人觀察了FK866對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)大鼠急性肺損傷肺組織及炎性細(xì)胞因子腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細(xì)胞介素(IL)-1β的影響,探討FK866對(duì)急性肺損傷的影響。方法：將成年雄性健康清潔級(jí)SD大鼠50只隨機(jī)分為5組,每組10只,分別為生理鹽水(NS)對(duì)照組NS+NS(A組)、單純給藥組NS+FK866(B組)、急性肺損傷模型組LPS+NS(C組)、藥物干預(yù)組LPS+FK866(D組)及溶媒對(duì)照組LPS+二甲基亞砜(E組)。采用尾靜脈注射LPS的方式建立大鼠急性肺損傷模型,給藥6 h后觀察大鼠的一般情況,檢測(cè)大鼠肺組織中TNF-α和IL-1β的水平及肺組織病理切片的變化。結(jié)果：與C組比較,D組大鼠肺組織損傷明顯減輕,同時(shí)肺組織中TNF-α和IL-1β的水平明顯降低。結(jié)論：FK866對(duì)內(nèi)毒素急性肺損傷大鼠具有一定的肺保護(hù)作用。

蔣師放等人探討了FK866在對(duì)乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷(acute liver injury,ALI)中的保護(hù)作用及機(jī)制。方法:24只6周齡的雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、FK866組、APAP組、FK866加APAP組。通過(guò)比色法檢測(cè)血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酸(aspartate aminotransferase,AST)活性;HE染色觀察肝組織病理學(xué)變化;酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血清中白細(xì)胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量;Western blot檢測(cè)尼克酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(nicotinamide phosphoribosyl-tiansferase,NAMPT)的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:FK866加APAP組中,ALT和AST分別為(13.969±0.290)、(7.150±0.669)IU/L,較APAP組明顯降低(ALT:F=364.709,P=0.000;AST:F=130.398,P=0.000),可見(jiàn)肝臟組織小葉結(jié)構(gòu)較清晰,細(xì)胞變性輕微,無(wú)明顯淤血;炎癥因子IL-6、IL-1β、TNF-α檢測(cè)值分別為(176.333±0.775)、(79.765±1.000)、(147.083±1.000)pg/mL,較APAP組含量明顯減少(IL-6:F=207.106,P=0.000;IL-1β:F=165.027,P=0.000;TNF-α:F=118.636,P=0.000);NAMPT蛋白表達(dá)水平較APAP組下調(diào)。結(jié)論:FK866在APAP誘導(dǎo)的ALI中對(duì)肝臟具有保護(hù)作用,其機(jī)制可能與抗炎效應(yīng)相關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1] 張斌. FK866調(diào)控NAMPT/NAD~+/SIRT1信號(hào)通路對(duì)肝癌MHCC97-H細(xì)胞EMT的影響及機(jī)制研究[D].濟(jì)南大學(xué),2019.

[2] 李清梅,袁名權(quán),陳虎,羅榮,段顯榮,秦榜勇.FK866對(duì)脂多糖誘導(dǎo)大鼠急性肺損傷的影響[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2018,34(17):2635-2637+2641.

[3] 蔣師放,陳倩竹,馬磊,范克瑞,胡凱,陳益,許娟娟,姜蓉,李龍江.FK866在對(duì)乙酰氨基酚誘導(dǎo)的急性肝損傷中的保護(hù)作用及機(jī)制研究[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2018,43(11):1433-1436.