背景及概述^[1]

維多利亞藍膠原纖維染色液可用于膠原纖維和彈力纖維雙重染色，重復性好，對比清晰，色彩鮮艷且不易褪色。

配制方法^[1]

維多利亞藍2g，糊精0.5g，間苯二酚4g，蒸餾水200ml。將上述物質混合后加熱煮沸，邊煮邊攪拌，約5分鐘。然后用另一容器取30％三氯化鐵水溶液25ml，另行加熱煮沸后慢慢倒入上述混合液中，繼續(xù)煮沸3分鐘，不斷攪拌溶液呈膠體狀。去火冷卻過濾，將濾紙上的殘渣連同濾紙一起放在60。Ｃ恒溫箱中烤干。殘渣呈深藍色細顆粒狀粉末，再將其溶于400ml的７0％乙醇液中。然后加濃鹽酸4ml和苯酚5g，放置至成熟后使用。

染色方法^[1]

（1）組織切片厚6um，脫蠟至水。

（2）將切片入70％乙醇中洗2min。

（3）直接浸入盛有維多利亞藍液瓶中染0.5h。

（4）入95％乙醇中分色數(shù)秒鐘。

（5）蒸餾水洗2min。

（6）用天狼星紅飽和苦味酸液染切片15min。

（７）無水乙醇直接分化脫水。

（8）二甲苯透明，中性樹膠封固。

結果^[1]

膠原纖維呈紅色，彈力纖維成藍綠色，紅細胞及肌肉呈黃色。

注意事項^[1]

1、懸浮細胞用此法時必須經(jīng)離心后才能吸出上清再加DMSO。

2、Formazan 的生成不僅與活細胞數(shù)成比例，也受作用時間的影響，因此當樣品較多時測定的OD 值可能隨時間而變。

3、MTT 溶液為黃色，需避光保存，長時間光照會導致失效。當顏色變?yōu)榛揖G色時，請勿使用。MTT 溶液在4℃或較低溫度情況下會凝固，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。

主要參考資料

[1] 膠原纖維和彈力纖維雙重染色方法的改進