葒草苷性質(zhì)、用途與生產(chǎn)工藝
金蓮花是毛茛科植物金蓮花Trollius chinensis Bunge的干燥花及花蕾，廣泛分布于西南、西北、華北、東北地區(qū)?！侗静菥V目拾遺》謂其“味苦，性寒，無毒”，可“治口瘡、喉腫、浮熱牙宣、耳疼、目痛”，并具“明目、解嵐障”之功效。前期研究發(fā)現(xiàn)，金蓮花總黃酮具有抗氧化、抗腫瘤等作用。
葒草苷（orientin）是一種具有生物活性的黃酮類化合物單體，分布廣泛，在金蓮花總黃酮中較高，還廣泛分布于陵齒蕨科（Lindsaeacea）烏蕨屬植物，剛竹屬（Phyllostachys）竹葉、木豆（Cajanus cajan( L.) Millsp.）葉、山楂屬光葉桑（Crataegus laevigata）等多種藥用植物中。葒草苷具有顯著的抗氧化、抗凋亡、抗脂質(zhì)形成、抗輻射、鎮(zhèn)痛、抗血栓等作用，現(xiàn)以其為主要成分的葒葉心通軟膠囊和葒草復(fù)方凍干粉制劑已投入臨床應(yīng)用，主治冠心病、心絞痛、心血瘀阻癥等心血管疾病。目前，以葒草苷為主要藥效成分的葒葉心通軟膠囊、葒草復(fù)方凍干粉劑制劑已經(jīng)應(yīng)用于臨床，在治療冠心病、心絞痛、心血瘀阻癥方面發(fā)揮重要作用。根據(jù)目前對葒草苷的研究得知，葒草苷具有對缺血心肌的保護(hù)作用，可刺激血管細(xì)胞產(chǎn)生NO，并使cGMP水平升高，可通過NO-cGMP信號通路減少心肌缺血-再灌注誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷；另外，可舒張血管平滑肌，其舒張作用是由于對血管內(nèi)皮的直接作用和對血管平滑肌抑制了受體依賴的 Ca2+通道及電壓依賴的 Ca2+通道，并且葒草苷對苯腎上腺素引起快速收縮及依賴性收縮反應(yīng)均有抑制作用；同時(shí)還表現(xiàn)出抗血栓形成的作用，這對心肌缺血腦缺血等心腦血管疾病的防治具有重要意義。此外，葒草苷在抗凋亡、鎮(zhèn)痛方面也具有顯著作用，說明葒草苷具有廣闊的應(yīng)用前景。
葒草苷對心肌缺血、心肌梗塞的保護(hù)作用
葒草苷對大鼠急性心肌缺血具有預(yù)防和治療的雙重作用。冠狀動(dòng)脈供血不足或心肌細(xì)胞耗氧量增加是導(dǎo)致心肌缺血的主要原因。實(shí)驗(yàn)表明，表明葒草苷對垂體后葉素所致的急性心肌缺血具有一定的預(yù)防作用；對異丙腎上腺素所致的急性心肌缺血具有一定的治療作用；預(yù)防性給予葒草苷可以增強(qiáng)心肌梗塞大鼠心肌收縮功能，減輕心肌缺血程度，保護(hù)缺血心肌，主要體現(xiàn)在以下方面：1）葒草苷干預(yù)的急性心肌梗塞大鼠血清中缺血性心肌酶LDH、ALT及AST活性較模型組明顯降低，表明葒草苷可以減輕心肌細(xì)胞變性反應(yīng)，保護(hù)心肌缺血損傷；2）葒草苷干預(yù)提高急性心肌梗塞大鼠血清中抗氧化酶活性，減輕心肌代謝產(chǎn)生的自由基對心肌細(xì)胞的損害，降低心肌梗塞程度。此外，葒草苷還能通過抑制脂質(zhì)吸收，促進(jìn)脂類分解和排泄，從而抑制動(dòng)脈粥樣硬化；葒草苷還具有抗缺氧及抗血小板聚集的作用；同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)葒草苷可顯著抑制花生四烯酸誘導(dǎo)的血小板聚集，從而抑制心肌缺血；此外，葒草苷還能顯著增加離體豚鼠心臟的冠脈流量，從而改善心肌缺血的程度，然而其具體機(jī)制尚未闡明。
葒草苷的在缺血-再灌注過程中對心肌的保護(hù)作用
心肌缺血可導(dǎo)致心絞痛、心肌梗塞等心血管疾病，而通過溶栓、冠脈搭橋術(shù)等方法可恢復(fù)心肌供血，可達(dá)到對抗心肌缺血的效果，然而心臟病學(xué)研究和心臟手術(shù)中發(fā)現(xiàn)，在心臟缺血后，再灌注過程可明顯誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，加重心肌損傷，稱缺血-再灌注損傷（ischemia-reperfusion injury，I/R）。葒草苷可以在一定濃度范圍內(nèi)劑量依賴性的抑制促凋亡蛋白Bax Cty-c Caspase-3的表達(dá)，從而減弱心肌I/R誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡。此外，葒草苷還能夠顯著增加新生小鼠心肌細(xì)胞中抗凋亡基因bcl-2的表達(dá)，抑制Bax Cyt-c Caspase-3表達(dá)，從而抑制缺氧-復(fù)氧誘導(dǎo)的新生小鼠心肌細(xì)胞凋亡。
葒草苷的抗血栓活性
血栓是引起心肌梗塞的一個(gè)重要因素，溶栓是治療心肌梗塞的醫(yī)學(xué)方法之一。實(shí)驗(yàn)表明，葒草苷能顯著延長小鼠凝血時(shí)間、家兔KPTT 及TT，提示其是通過干擾內(nèi)源性凝血系統(tǒng)因子的活性，從而使纖維蛋白的生成受到抑制。葒草苷還能顯著延長家兔 PT，提示其是通過干擾外源凝血系統(tǒng)因子的活性而抑制凝血酶原向凝血酶的轉(zhuǎn)變，從而使纖維蛋白原向纖維蛋白的轉(zhuǎn)變受到抑制。葒草苷能顯著抑制ADP 引起的家兔血小板聚集，從而具有抑制動(dòng)脈血栓形成的作用。 葒草苷不能縮短 ELT，也不能減輕小鼠全血凝塊的重量，說明葒草苷不具有纖溶活性。綜上所述，葒草苷具有活血化淤作用，可以通過干擾內(nèi)源性凝血系統(tǒng)因子的活性，抑制纖維蛋白的生成，延長小鼠和家兔的凝血時(shí)間。
葒草苷的抗輻射作用
研究發(fā)現(xiàn)，葒草苷具有抗輻射作用。小鼠接受11Gyγ-射線全身照射后，腹腔注射給予葒草苷可以防止小鼠死于胃腸道綜合征和骨髓型綜合征，最佳治療量為50mg/kg體重，增加劑量保護(hù)作用不增加。此外，小鼠接受1 Gy60Coγ-射線全身照射后，腹腔注射葒草苷，與對照組相比，可以顯著降低胎鼠染色體變異、成鼠造血細(xì)胞異常，全血細(xì)胞計(jì)數(shù)恢復(fù)至正常值，同時(shí)可減少腫瘤發(fā)生率延遲腫瘤擴(kuò)散。葒草苷抗輻射的作用機(jī)制可能與其抗氧化性有關(guān)，而其具體機(jī)制還未能闡明。
葒草苷的鎮(zhèn)痛作用
葒草苷還具有鎮(zhèn)痛作用。研究發(fā)現(xiàn)葒草苷可以劑量依賴性地抑制乙酸、辣椒素以及谷氨酸鹽誘導(dǎo)的疼痛，其鎮(zhèn)痛作用是解熱鎮(zhèn)痛藥乙酰水楊酸的20倍，是吲哚美辛（消炎痛）鎮(zhèn)痛作用的3. 5倍。
抗氧化作用
實(shí)驗(yàn)表明 ，一定的濃度范圍內(nèi)，葒草苷對O2-和DPPH具有較好的清除作用；對ONOO-具有高效的清除效果，對SIN-1 誘導(dǎo)氧化致?lián)p心肌細(xì)胞具有一定的保 護(hù)作用。葒草苷對ONOO-所致病理損傷的疾病防治具有較好的應(yīng)用前景，葒草 苷在高濃度時(shí)，可能存在自氧化作用，還需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證實(shí)。
抗癌\抗病毒活性
葒草苷與DNA主要通過疏水作用力以嵌入模式結(jié)合，從而改變了DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)，影響了其復(fù)制，這可能是其具有抗癌抗病毒活性的原因之一。葒草苷對EC-109細(xì)胞具有抑制細(xì)胞生長增殖作用，能夠誘導(dǎo)食管癌EC-109細(xì)胞出現(xiàn)早期凋亡，作為一種黃酮碳苷有可能成為一種新型抗食管癌的藥物。
色譜條件
分析條件：采用C18反相色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm，Sigma），柱溫30 ℃，流動(dòng)相為乙腈-0.3%乙酸水溶液，梯度洗脫條件：0～16 min，11%乙腈16～18 min，11%～13%乙腈；18～40 min，13%～16%乙腈；40～42 min，16%～18%乙腈；42～60 min，18%～100%乙腈；60～65 min，100%～11%乙腈；進(jìn)樣量為20 μL，體積流量為0.7 mL/min，檢測波長為330 nm，運(yùn)行時(shí)間為70 min。
PHPLC條件：使用C18反相半制備色譜柱（250 mm×10 mm，5 μm，SunFire
TM），柱溫為20 ℃，甲醇-0.3%乙酸水溶液（33∶67），進(jìn)樣體積400 μL，體積流量5 mL/min，檢測波長330 nm，運(yùn)行時(shí)間為40 min。
樣品的吸附洗脫
稱取50 g的竹葉黃酮，使用500 mL無水乙醇溶解，真空抽濾除去極性大的多糖類物質(zhì)，然后將清液旋干，再使用1 L純水溶解，真空抽濾除去極性小的黃酮內(nèi)酯類的物質(zhì)。將處理好的樣品用超純水稀釋至4 L（質(zhì)量濃度約為8g/L），并調(diào)節(jié)pH值為5，上樣于裝好AB-8樹脂的常壓玻璃柱中（10cm×60cm），依次使用1.5 BV的0、10%、20%、30%、40%、50%、60%、65%乙醇溶液洗脫，收集時(shí)每500毫升為1瓶，其中40%乙醇洗脫條件下，得到異葒草苷（質(zhì)量分?jǐn)?shù)18.0%）和葒草苷（質(zhì)量分?jǐn)?shù)10.1%）的洗脫液。
葒草苷和異葒草苷單體的PHPLC分離
將所得的洗脫液（質(zhì)量濃度為4.2 mg/mL），按所述的PHPLC條件進(jìn)行單體分離。分別收集組分1、2，經(jīng)一步分離即可得到高質(zhì)量分?jǐn)?shù)的葒草苷和異葒草苷單體，通過減壓蒸餾，真空干燥得到產(chǎn)品粉末。
葒草苷在不同種屬動(dòng)物組織的分布均沒有差異，腎臟中濃度最高，其次是肝，腦中含量最少。
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化學(xué)性質(zhì)
來源于毛茛科植物金蓮花
用途
用于含量測定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。
藥理藥效:葒草苷對缺氧-復(fù)氧心肌細(xì)胞損傷具有一定的保護(hù)作用。
葒草苷
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