刺五加提取物性質(zhì)、用途與生產(chǎn)工藝
刺五加提取物是從刺五加Acanthopanax senticosus (Rupr. et Maxim) Harms的根及根莖提取的的一種活性物質(zhì)，主要活性成分為刺五加苷B、E。具補(bǔ)陽(yáng)益氣、調(diào)節(jié)機(jī)體功能。
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落葉灌木，高達(dá)1~5米。莖通常密生細(xì)長(zhǎng)倒刺。掌狀復(fù)葉，互生;葉柄長(zhǎng)3~12厘米，有細(xì)刺或無(wú)刺;小葉5，稀4或3，小葉柄長(zhǎng)0.5~2.5厘米，被褐色毛;葉片橢圓狀倒卵形至長(zhǎng)圓形，長(zhǎng)5~15厘米，寬3~8厘米，先端漸尖或突尖，基部楔形，上面暗綠色，下面淡綠色，沿脈上密生淡褐色毛，邊緣具重鋸齒或鋸齒。傘形花序頂生，單個(gè)或2~4聚一成稀疏的圓錐花序，總花梗長(zhǎng)達(dá)8厘米;花梗1~2厘米;萼筒綠色，與子房合生，萼齒5;花瓣5，卵形，黃色帶紫;雄蕊5;子房5?；ㄖ?xì)柱狀。核果漿果狀，紫黑色，近球形，花柱宿存。種子4~6粒，扁平，新月形?；ㄆ?—7月，果期7—9月。
刺五加屬植物全世界有約40種， 我國(guó)有30多種。
刺五加主要分布于黑龍江 (小興安嶺、張廣才嶺、老爺嶺、完達(dá)山脈等)、吉林 (長(zhǎng)白山、安圖、撫松、通化、吉林市、龍縣等)、遼寧 (桓仁、本溪、寬甸、鐵嶺、海城等)、河北 (燕山、小五臺(tái)山)、山西 (霍縣、中陽(yáng)、興縣) 等地。俄羅斯遠(yuǎn)東沿海山區(qū)、薩哈林島 (庫(kù)頁(yè)島)、朝鮮北部及日本北海道等地亦產(chǎn)。以我國(guó)小興安嶺、黑龍江中游地區(qū)分布較集中。
圖1為刺五加
1. 刺五加苷類
刺五加苷 (Eleutheroside) A、B、B1、C、D、E、F、G， 化學(xué)結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖2， 刺五加苷A即胡蘿卜苷， 為甾體苷; 刺五加苷B即為紫丁香苷 (Syringin)， 為酚苷; 刺五加苷B1即為異秦皮定葡萄糖苷 (Isofraxidin-glycoside)， 為香豆精苷; 刺五加苷E即為紫丁香樹(shù)脂酚二葡萄糖苷 (Syringaresinol-diglucoside)， 刺五加苷D即刺五加苷E的異構(gòu)體， 二者為木脂素苷。刺五加苷A、B、C、D、E、F、G含量比約為8：30：10：12：4：2：1。
從刺五加莖葉中分離得到異秦皮定 (Isofraxidin) 即7-羥基-6，8-二甲氧基香豆素、4，4-二羥基3， 3’-二甲氧基芪、阿魏酸葡糖苷 (Feruloyl sucrose)、新刺五加酚(Neociwu-jiaphenol)、刺五加酮 (Ciwujiatone) 等。葉含刺五加苷I、K、M、L和刺五加葉苷 (Sentico-side) A、B、C、D、E、F， 其苷元均為齊墩果酸， 另含有金絲桃苷。
2. 多糖類
刺五加多糖 (ASPS) 由葡萄糖、果糖、阿拉伯糖等組成。另含有蔗糖、多糖等。
3.其他成分
維生素C、E、l-芝麻素 (l-sesamin)、無(wú)羈萜 (friedelin)、白樺脂酸、揮發(fā)油等。
圖2為刺五加苷類的化學(xué)結(jié)構(gòu)式
將藥材用粉碎機(jī)粉成粗粉， 投入多能式中藥提取罐中， 加去離子水， 攪拌沸騰提取，放液; 將提取液放入三足離心機(jī)中， 離心去渣， 得離心液， 減壓濃縮得10～18波美 (熱測(cè)) 的浸膏， 噴霧干燥得干粉， 將干粉粉碎， 過(guò)60～80目篩， 混合、包裝得成品。
本工藝適用于含刺五加苷1.2%左右的刺五加提取物的生產(chǎn)， 其收率在4%～5%。
總多糖提取分離：水的用量為12倍藥材量; 煎煮時(shí)間6小時(shí); 醇沉前水煎煮液的濃縮度為1.5。
圖3為刺五加多糖提取工藝
藥性：味辛、微苦，性溫。歸脾、腎、心經(jīng)。
功效：益氣健脾，補(bǔ)腎安神，祛風(fēng)除濕。
1.抗癌作用
刺五加提取物對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性的移植瘤、藥物誘發(fā)瘤， 癌的轉(zhuǎn)移和小鼠自發(fā)白血病都有一定的抑制作用。
2.對(duì)心血管系統(tǒng)的作用
刺五加提取物能改善大腦的供血量， 抑制血小板聚集， 還能抗心律失常。
3.促性腺作用
刺五加苷促時(shí)雌雄小鼠性早熟和體重增加。
4.抗疲勞作用
刺五加總苷及其提取物有明顯的抗疲勞作用， 且較人參為強(qiáng)。
5.“適應(yīng)原樣” 作用
刺五加總苷能改變機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)警戒期的病理過(guò)程， 防止在此過(guò)程中的腎上腺增生，膽甾醇含量降低， 胸腺縮小及胃出血情況減少。刺五加提取物有和人參一樣的 “適應(yīng)原樣”作用。
6.抑菌作用
刺五加的醇提取物能提高巨噬細(xì)胞吞噬紅細(xì)胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)。刺五加的醇提取液及水提取液對(duì)白色念珠菌有抑制作用，而醇提取物對(duì)大腸埃希菌也有一定的抗菌效果。
7.增加機(jī)體對(duì)有害因素的抵抗力
刺五加提取物能降低正常皮膚對(duì)紫外線照射的敏感性，增加毛細(xì)血管在低氧下的抗御能力。
8.對(duì)泌尿生殖系統(tǒng)的影響
刺五加根提取物和葉分離得到的總甙或刺五加B或E均能增加體重、前列腺和精囊重量及RN含量。還能提高母雞產(chǎn)蛋量，并增加輸卵管中總氮量和蛋白質(zhì)。
9.對(duì)呼吸系統(tǒng)的影響
口服刺五加醇浸水溶液有顯著止咳作用。刺五加根口服，呈明顯祛痰作用。
10.鎮(zhèn)靜作用
醇浸膏水溶液10g/kg腹腔注射，能顯著抑制苯甲酸鈉咖啡因引起的小鼠自發(fā)活動(dòng)增加，并能顯著延長(zhǎng)異戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時(shí)間，縮短入睡的潛伏期。腹腔注射醇浸膏的水溶性多糖提取物，每只腹腔注射50%的溶液0.5mL，雖不能延長(zhǎng)小鼠注射印防己毒素的死亡時(shí)間，但卻能顯著地延長(zhǎng)小鼠發(fā)生驚厥的潛伏期。
11.對(duì)免疫功能的影響
豚鼠每日一次給予刺五加醇提水溶液，能明顯增強(qiáng)蛋白胨湯培養(yǎng)基所致豚鼠腹腔炎性滲出細(xì)胞對(duì)雞紅細(xì)胞的吞噬能力; 增加小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對(duì)炭粒的吞噬能力。刺五加對(duì)苯引起的小鼠、兔的白血球減少癥均有顯著預(yù)防作用; 對(duì)注射環(huán)磷酰胺引起的白血球減少亦有保護(hù)作用。刺五加多糖腹腔注射，可明顯增強(qiáng)小鼠脾分泌IgM的PFC;增強(qiáng)小鼠脾分泌IgG的PFC和小鼠對(duì)BSA誘導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)性(DTH)。刺五加能明顯增強(qiáng)CTL殺傷靶細(xì)胞的活性，同時(shí)對(duì)小鼠全脾細(xì)胞以及去T細(xì)胞后的脾細(xì)胞都有強(qiáng)的促有絲分裂作用，并能促進(jìn)ConA刺激的小鼠脾細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素-2 (IL-2)。刺五加多糖還能明顯增強(qiáng)小鼠脾細(xì)胞對(duì)ConA和LPS的增殖反應(yīng); 能明顯增加小鼠特異的抗體分泌指數(shù)。
性狀鑒別
根莖呈不規(guī)則結(jié)節(jié)狀圓柱形，直徑1.5～4.0cm，表面灰棕色，有縱皺，彎曲處有橫紋，皮孔橫長(zhǎng)微凸起。根圓柱形，多扭曲，長(zhǎng)可至15cm，直徑0.2～1.6cm。表面灰褐色或黑褐色，有細(xì)皺紋及縱溝，外皮剝落處呈灰黃色(圖1-263)。質(zhì)硬，斷面黃白色，纖維性。氣香特異，味微辛，略感苦澀。
以皮完整，斷面黃白色，香氣濃者為佳。
顯微鑒別
粉末 灰白色。①韌皮纖維淡黃色，長(zhǎng)條形，長(zhǎng)175～630μm，直徑15～50μm，壁厚薄不一，木化，孔溝粗而密，表面可見(jiàn)斜向交錯(cuò)紋理，有的胞腔具菲薄橫隔。②草酸鈣簇晶直徑8～90μm，棱角大而鈍，常破碎成小塊片。③木纖維多成束，無(wú)色或淡黃色，直徑8～14μm，壁薄，木化，可見(jiàn)橫隔膜。④韌皮射線細(xì)胞無(wú)色或淡黃色，切向壁具斜向交錯(cuò)或不規(guī)則網(wǎng)狀紋理。
理化鑒別
(1)取粉末5g，加75%乙醇50ml，加熱回流30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?5%乙醇5ml溶解，濾過(guò)。①取濾液1ml，加3%碳酸鈉溶液1ml與新制的重氮對(duì)硝基苯胺試液1～2滴，即顯紅色。②取濾液1ml，加5%亞硝酸鈉溶液及10%硝酸鋁溶液各3～5滴，稍放置，加氫氧化鈉試液2ml，即顯紅棕色。
(2)取粉末約5g，加75%乙醇50ml，加熱回流1h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶，用氯仿10ml，提取2次，合并氯仿液，水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶，作為供試品溶液。另取刺五加藥材5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取異秦皮啶對(duì)照品，加甲醇制成1mg/ml的溶液。吸取上速三溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇(95：5) 為展開(kāi)劑。層析板置紫外光燈 (254nm)下檢視。供視品色譜中，有與對(duì)照藥材相同的顏色斑點(diǎn); 有與對(duì)照品相同的藍(lán)色斑點(diǎn)。
紫外分光光度法測(cè)定刺五加苷的含量：
精確稱量5mg丁香苷對(duì)照品，用100ml甲醇溶解。分別取1.0、2.0、3.0、4.0和5.0ml上述溶液至10ml容量瓶中，加甲醇至相應(yīng)體積。用甲醇作空白對(duì)照。在波長(zhǎng)266nm測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
精密稱取刺五加提取物，置索氏提取器中，加入無(wú)水乙醇回流16小時(shí)，收集溶劑至一小容器，加入硅膠并充分?jǐn)嚢瑁盟∩险舭l(fā)至干;轉(zhuǎn)移至柱中，然后用100ml氯仿洗脫，洗脫液棄;再用氯仿-甲醇(9：1)洗脫，收集3000ml洗脫液，回收溶劑，用1.0ml甲醇溶解殘?jiān)?，?0u點(diǎn)于硅膠G-CMC薄層色譜板，用氯仿-甲醇(8：2)展開(kāi)，將紫外燈下呈深藍(lán)色熒光部分切取至試管中，切取板上空白部分作對(duì)照，分別精密加入5.0ml甲醇，溶解，攪拌并離心分離，移取上層清液并在波長(zhǎng)266nm處測(cè)定吸光度。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算丁香苷的分析結(jié)果。
(1) 急性毒性：刺五加醇水浸液350g/kg灌胃或刺五加全草注射液腹腔注射，每鼠 2.0g(生藥) 均未見(jiàn)異常。當(dāng)劑量增加到500g/kg，小鼠跳躍不安，10min后轉(zhuǎn)為安靜，1h后恢復(fù)正常，表明毒性小。根、莖、葉水提物對(duì)小鼠的平均致死量為14.5g/kg。另有報(bào)道，刺五加與人參相似，其提取物L(fēng)D50大都在10～30g/kg，刺五加苷對(duì)小鼠LD50為 47.50%。
(2) 亞急性毒性試驗(yàn)：刺五加醇浸水溶液每日灌胃18.3g/kg(為人常用劑量的60～100倍)，連續(xù)15日，或兔每日肌內(nèi)注射6g/kg，連注15日，血象、肝、腎的肉眼及組織學(xué)檢查均未發(fā)現(xiàn)異常變化。刺五加總黃酮水溶液小鼠灌胃，每只5.8mg/kg，連續(xù)7天，動(dòng)物全部存活，未見(jiàn)異常(此量為臨床用量的220倍)。另有報(bào)道，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物連服數(shù)月無(wú)毒性反應(yīng)。連服6個(gè)月除能延長(zhǎng)平均壽命外，未發(fā)現(xiàn)胚胎毒性及致畸。
刺五加提取物
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