"CCD-18Co正常人結腸成纖維復蘇細胞(附STR鑒定報告)

細胞生長：貼壁

細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

細胞內空泡通常是細胞受到壓力的表現(xiàn)，原因可能是培養(yǎng)基中缺乏谷氨酰胺、添加抗真菌劑、不適當?shù)腃O2環(huán)境對培養(yǎng)基中碳酸氫鈉濃度或培養(yǎng)基的營養(yǎng)消耗殆盡。一般來說，對于某些細胞系，尤其是向3T3-L1這樣具有脂滴的細胞，細胞包含空泡是正常的。缺氧：當缺氧時 細胞na泵動力不足導致細胞內水儲留，Na泵動力不足導致其不能向細胞外運送足量的Na，從而使細胞內處于GAO滲透壓狀態(tài)，更多胞外水分子進入胞內，造成水儲留?？梢岳斫鉃橐驗樗值牧魇?，細胞內出現(xiàn)細胞質的濃縮，從而出現(xiàn)空泡。原代細胞培養(yǎng)的過程中經常出現(xiàn)這樣的情況，是有些細胞處于終末分化狀態(tài)，不會再分裂，時間長了就會空泡化而死亡。傳代細胞出現(xiàn)這種狀況比較少見，可能的原因是細胞代齡較長，老化嚴重。傳代次數(shù)太多，細胞老化會出現(xiàn)上述的情況，但是還不排除其他因素，胞質中出現(xiàn)顆粒、脂滴或空泡也可能是細胞代謝不良的反應。我前一段時間養(yǎng)成纖維細胞（原代）的時候也出現(xiàn)過類似的情況。可以將血清的濃度提GAO10％到15％到20％；血清的質量，如果是國內的血清的話不同的批次之間的差異很大，可以借用些質量HAO的血清試試，看細胞狀態(tài)是否會改變；把細胞消化收集起來，然后離心后重懸，重新種植。培養(yǎng)基里添加谷氨酰氨；細胞代謝障礙的問題，傳代的次數(shù)可能不是關鍵因素,應該可以調整得過來；PH值不對，就用PH值試紙測了一下，大概6.7左右，加碳酸氫鈉調到7.2左右,過了一段就HAO了。不排除輕度污染的可能，重度污染會伴有培養(yǎng)液的渾濁；培養(yǎng)液的PH值與細胞正常所需PH值差別太大；還有一個大家易忽略的問題，我們從相關權威資料中查到如果消化細胞吹打時力度過大，產生太多氣泡，長期存在也會出現(xiàn)這種現(xiàn)象。

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細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

CCD-18Co正常人結腸成纖維復蘇細胞(附STR鑒定報告)

養(yǎng)細胞真的不難，關鍵幾點：所有的東西使用的，如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進口的，真的很難相信你會把細胞養(yǎng)壞。動作要快，胰酶消化，換液什么，細胞暴露在空氣中的時間越少越HAO。另外，要掌握HAO胰酶消化時間，所謂的細胞狀態(tài)差，很多時候是傳代的原因。有時間的話，需要細胞計數(shù)，傳相應數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中，可以大致清楚細胞的生長曲線，不會臨時要處理，手足無措。要做什么心里要非常清楚，合理安排時間，細胞房的實驗穿插進行，可以節(jié)省很多時間，也不會耽誤別人的實驗。個人的實驗器具自己收一套，不要和別人混用，近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟。細胞房不能進去太多人，避免相互干擾。

細胞背景資料：結腸；成纖維細胞；女性

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

CCD-18Co正常人結腸成纖維復蘇細胞(附STR鑒定報告)

[細胞產品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

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細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

傳代細胞時，使用無菌技術和合適的試劑及設備尤為重要。針對您的細胞系選擇合適的培養(yǎng)液來得到佳的生長和擴增很關鍵。每一個細胞系都有定的生長營養(yǎng)組分配方，但是大多數(shù)細胞系起碼需要的添加物有以下這些：血清，如胎牛血清，需熱處理滅活其胎牛成分，它為細胞生長提供重要的生長因子?？股?，如青霉素和鏈霉素用于防止細胞污染。其他的生長因子，如成纖維細胞生長因子，有助于延長細胞系的生長和擴增。不使用時，要將這些添加物或者“完全”細胞培養(yǎng)液保存于4攝氏度。首先要注意細胞培養(yǎng)液的顏色，富含營養(yǎng)的新鮮培養(yǎng)液由于添加了pH指示劑酚紅故為透明橙色。當細胞耗盡培養(yǎng)液中的營養(yǎng)成分時，開始在培養(yǎng)物中積累廢物和酸性物質，降低pH值。因此，許多細胞培養(yǎng)液含有酚紅，當培養(yǎng)物呈酸性時會將培養(yǎng)液顏色由橙色變?yōu)辄S色。培養(yǎng)液需在變黃之前更換。當酚紅變?yōu)榉奂t色時，說明培養(yǎng)基pH偏堿，不利于細胞健康生長。這時可能需要改變二氧化碳濃度并更換培養(yǎng)液。很多貼壁細胞系可天然附著于無涂層的塑料上。因此，塑料細胞培養(yǎng)板如培養(yǎng)皿或六孔板經常用于傳代細胞。塑料的細胞培養(yǎng)瓶也經常用到，如T25的細胞培養(yǎng)瓶，常用于擴增培養(yǎng)數(shù)目少的細胞或者開始培養(yǎng)生長緩慢的細胞系。T75細胞培養(yǎng)瓶常用在培養(yǎng)擴增速度較快的細胞系或用于生長超過T25培養(yǎng)瓶容量的大量細胞。在轉移貼壁細胞時，要先剪切掉細胞上與和塑料結合的蛋白。因此，消化酶胰酶常用于消化細胞?？刂埔让赶臅r間很重要，因為如果處理時間過長會損壞細胞表面的蛋白。細胞培養(yǎng)液能中和胰酶。所以在胰酶消化前常用磷酸緩沖液或PBS洗滌細胞。EDTA，一種鈣螯合劑有時候也用于提GAO胰酶的蛋白水解功能。為擴增細胞克隆，將新鮮傳代的細胞培養(yǎng)于細胞培養(yǎng)箱中，選擇適合該細胞生長條件，通常為溫度37度，二氧化碳5％和濕度95%。

細胞生長特性：貼壁

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