"NALM-6 Cell|人急性B淋巴白血病細胞
細胞背景資料:急性B淋巴細胞白血病;男性
細胞形態(tài):淋巴母細胞樣
體內細胞培養(yǎng)及其操作步驟:【瘤細胞懸液接種】1)無菌選取生長良HAO(有光澤,淡紅色)瘤組織或對數生長期培養(yǎng)瘤細胞;2)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨,經80~100目篩網過濾成細胞懸液;3)培養(yǎng)細胞應用PBS洗兩遍;4)計數并調整細胞濃度至107~108/ml;5)常規(guī)消毒后,于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細胞懸液(0.1ml/部位,>106細胞)。初次接種成功率低,細胞數盡可能多一些;6)次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期,以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短,Zui后固定為一個相對穩(wěn)定的時間?!靖顾龅慕⑴c腹水瘤的接種】將實體瘤細胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位,引起腹水,腹水中含有瘤細胞,將這種腹水反復傳代,即可成為腹水瘤。初次傳代時,腹水常呈血性(含大量紅細胞),反復傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下。1)將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細胞離心和洗滌,進行細胞計數;2)消毒動物,左下腹穿刺接種106腹水瘤細胞;3)接種腹水瘤細胞后約7~12d,待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部,用9號針頭抽取腹水,也可行腹部解剖后,用滴管吸取。每只小鼠可抽3~5ml;4)抽取的腹水經3000rpm離心15min,收集上清,分裝凍存?zhèn)溆谩?/p>
細胞生長:懸浮
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細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
NALM-6 Cell|人急性B淋巴白血病細胞
[細胞產品包裝]鮮活細胞:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞:1ml凍存管(兩支)
傳代的操作步驟注意事項:1)操作前要洗手,進入超凈臺后手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。2)點燃酒精燈,操作在火焰附近進行,耐熱物品要經常在火焰上燒灼,金屬器械燒灼時間不能太長,以免退火,并冷卻后才能夾取組織,吸取過營養(yǎng)液的用具不能再燒灼,以免燒焦形成碳膜。3)操作動作要準確敏捷,但又不能太快,以防空氣流動,增加污染機會。4)不能用手觸已消毒器皿的工作部分,工作臺面上用品要布局合理。5)瓶子開口后要盡量保持45℃斜位。6)吸溶液的吸管等不能混用。貼壁細胞傳代的操作步驟:1)吸除培養(yǎng)瓶內舊培養(yǎng)液。2)向瓶內加入胰蛋白酶和EDTA混合液少許,以能覆滿瓶底為限。3)置溫箱中2-5分鐘,當發(fā)現細胞質回縮,細胞間隙增大后,立即終止消化。4)吸除消化液,向瓶內注入Hanks液數毫升,輕輕轉動培養(yǎng)瓶,把殘余消化液沖掉。注意加Hanks液沖洗細胞時,動作要輕,以免把已松動的細胞沖掉流失,如用胰蛋白酶液單獨消化,吸除胰蛋白酶液后,可不用Hanks液沖洗,直接加入培養(yǎng)液。5)用吸管吸取營養(yǎng)液輕輕反復吹打瓶壁細胞,使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。6)計數板計數后,把細胞懸液分成等份分裝入數個培養(yǎng)瓶中,置溫箱中培養(yǎng)。懸浮細胞傳代的操作步驟:1)吸出細胞培養(yǎng)液,放入離心管中,離心1000rpm5分鐘。2)吸掉上清液,加入適量之新鮮培養(yǎng)基,混和均勻后,依稀釋比例轉移至新的培養(yǎng)瓶中,以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
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細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。
細胞來源說明:來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫
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細胞生長特性:懸浮
細胞培養(yǎng)中的污染分為兩類,化學污染和生物污染;生物污染包括比較容易發(fā)現的細菌、霉菌和酵母的污染,和較難發(fā)現的病毒、支原體和其他細胞的污染。細菌、霉菌和酵母到處存在,它們能在合適的環(huán)境中非??焖俚纳L。這些污染比較容易觀察到,它們往往會使其污染的培養(yǎng)液產生可見的變化,或者通過顯微鏡觀察就可以看見。由于病毒有種屬異性,所以病毒污染的概率比較小。但是病毒污染難于發(fā)現,因為病毒顆粒別微小,一般的實驗室都沒能力檢查細胞培養(yǎng)中污染的病毒。由于病毒一般潛伏在細胞內,對整個細胞培養(yǎng)不是致死的,所以它可能會使研究人員長期得到受病毒影響的細胞的實驗結果。1956年Robinson及其同事首次發(fā)現細胞培養(yǎng)中的支原體污染。90年代初的一個調查發(fā)現,在美國培養(yǎng)的細胞中,至少有15%被支原體污染。由于支原體沒有細胞壁,在細胞培養(yǎng)液中幾乎是透明的,同時對常用于細胞培養(yǎng)中的抗生素不敏感,不引起pH變化,不使培養(yǎng)液渾濁,所以支原體污染不容易被發(fā)現,但是其存在會影響實驗的結果。培養(yǎng)多種細胞時操作不當,會導致細胞的交叉污染。由于不同細胞的生產速率不同,污染的生長速率快的細胞終會完全取代被污染的細胞。
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關鍵字: NALM-6 Cell|人急性B淋巴白血;DSMZ細胞株;ATCC細胞系;RCB細胞;ECACC細胞庫;
上海冠導生物工程有限公司,先后從ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、PromoCell、ScienCell、JCRB等國內外細胞庫引進細胞2000余株。以此為契機,公司組建了冠導細胞庫,我司細胞均由資深細胞培養(yǎng)工程師進行培養(yǎng)。我司可以提供的細胞有:①細胞系②原代細胞③穩(wěn)轉株④耐藥株⑤標記細胞⑥細胞配套試劑等。