THP-1 人單核細胞白血病細胞介紹

該細胞對乳汁珠和激活的紅細胞有吞噬作用，無表面和胞質(zhì)免疫球蛋白?？梢杂梅鸩ù?TPA誘導(dǎo)單核細胞分化。

細胞特性

1） 來源：急性單核細胞白血病，單核細胞

2） 形態(tài)：單核細胞，懸浮

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；

（2）存活細胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系。

細胞用途：僅供科研使用。

THP-1 人單核細胞白血病細胞接收后的處理：

1） 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3） 觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。

5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。

6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。 

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備RPMI-1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；0.05 mM β－巰基乙醇（推薦iCell-8211）；雙抗，1%。

2） 參考傳代比例：傳代時控制細胞密度在2-4 ×105cell / mL，并在細胞生長至8-10 ×105cell / mL時進行傳代。

3） 參考換液頻率：傳代時換液

4） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

5） 凍存液：完全培養(yǎng)液95%，DMSO 5%（使用該凍存液后，按照我?guī)斓慕?jīng)驗復(fù)蘇存活率約50%，復(fù)蘇后需要額外培養(yǎng)7-10天才能恢復(fù)生長）

6） 【注意事項】：

a) 該細胞為懸浮細胞，根據(jù)培養(yǎng)經(jīng)驗以及客戶的反饋，傳代時使用【半換液法】對細胞狀態(tài)較為有利，因此我?guī)旖ㄗh您使用【半換液法】進行傳代。同時，您在收到細胞后，請不要通過離心的方式收集細胞，可以直接向培養(yǎng)瓶中添加等體積的新鮮培養(yǎng)液，然后將細胞吹打均勻后移入兩個新的T25培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)即可。

b) 細胞對血清質(zhì)量較為敏感，我?guī)旖ㄗh您使用進口大品牌優(yōu)質(zhì)血清進行培養(yǎng)。

c) 該細胞的培養(yǎng)液中需添加β-巰基乙醇（細胞培養(yǎng)級別，可參考細胞說明書中的品牌、貨號），若不添加，可能會對細胞狀態(tài)造成影響。

d) 該細胞對細胞密度較為敏感，培養(yǎng)、傳代時請注意保持細胞密度在合適的范圍（具體請參考細胞說明書）。

e) 該細胞凍存后復(fù)蘇率較低，凍存時請酌情提高細胞量

ATCC有關(guān)thp-1細胞保持細胞活力的說明

https://www.atcc.org/support/faqs/2ed94/Seeding%20density%20for%20TIB-202.aspx?device=modal

（thp-1懸浮細胞。這些細胞更喜歡條件培養(yǎng)基和溫和處理，而不是離心和全培養(yǎng)基更換。添加細胞培養(yǎng)基以稀釋細胞至維持密度。

頻繁的細胞計數(shù)是監(jiān)測thp-1的方法。這些細胞應(yīng)該每2至3天通過向燒瓶中簡單加入少量新鮮培養(yǎng)基（使它們具有條件培養(yǎng)基）來培養(yǎng)。您不需要每次都離心細胞并重新傳代。當(dāng)在我們的實驗室中培養(yǎng)時，到第2天，細胞通常可以擴增到具有更多培養(yǎng)基的更大的燒瓶中。當(dāng)細胞密度達到8×10 5個活細胞/ ml時需要進行傳代。不允許細胞密度超過1×10（6）活細胞/ ml。）

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：傳代時控制細胞密度在2-4 ×105cell / mL，并在細胞生長至8-10 ×105cell / mL時進行傳代。

3） 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。   

下面T25瓶為類；

1，細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1x10E6/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。