"Kit225/K6 Thawing人T淋巴細胞系
細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹
細胞形態(tài)：淋巴母細胞樣
Kit225/K6 Thawing人T淋巴細胞系
細胞生長：懸浮
培養(yǎng)細胞的凍存及復(fù)蘇：細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細胞凍存在-１９６℃液氮中，儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融。【凍存細胞】１)選對數(shù)增生期細胞(證明無支原體污染)，在凍存前１d換液；２)按常規(guī)方法把培養(yǎng)細胞制備成懸液，計數(shù)，使細胞密度達５×１０／ml左右密度，離心，去上清；３)加入配制好的凍存液(培養(yǎng)液６.８ml，小牛血清２ml，DMSO １ml，５.６%NaHCO３ ０.１ml)，按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養(yǎng)液中加入保護劑１０％二甲基亞砜(DMSO)或甘油，可使冰點降低，使細胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細胞外；４)分裝于無菌凍存管中，每管加１.５m懸液；５)旋好凍存管并仔細檢查，一定要蓋緊，做好標記；６)凍存：在特殊的儀器或簡易的液氮容器中，按-１℃／min的速度，在３０～４０min時間內(nèi)，下降到液氮表面，再停３０min后，直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度，過快能影響細胞內(nèi)水分透出，太慢則促進冰晶形成。操作時應(yīng)戴防護眼鏡和手套，以免液氮凍傷。【復(fù)蘇細胞】１)從罐中取出凍存管；２)迅速放入３６℃～３７℃水浴，不時搖動，使其急速融化，３０～６０s內(nèi)完成；３)凍存管用７０％酒精擦拭消毒后，打開蓋子，用吸管將細胞懸液注入離心管中，再滴加１０ml培養(yǎng)液；４)低速離心(５００～１０００r／min) ５min，去上清后再用培養(yǎng)液洗一次；５)用培養(yǎng)液適當稀釋后，裝入培養(yǎng)瓶３７℃培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后，繼續(xù)培養(yǎng)。以后仍按常規(guī)進行培養(yǎng)。凍存細胞數(shù)量要充分，密度應(yīng)達到１０／ml，在融后稀釋２０倍時，仍能保持５×１０／ml數(shù)量。
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
有一些細胞是數(shù)量多一點比較好生長，生長狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的細胞。譬如內(nèi)皮細胞。而有一些是細胞是數(shù)量少一點細胞狀態(tài)會生長的比較好，譬如巨噬細胞和某些腫瘤細胞。尤其是巨噬細胞，生長速度非常得快，貼壁速度很快，所以傳代時就應(yīng)該留很少量的細胞，這樣細胞狀態(tài)會比較好。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長，而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候，細胞形態(tài)基本上就會差了，老化的會比較多，對后期實驗結(jié)果是不好的。所以在養(yǎng)細胞的時候應(yīng)該摸索該細胞喜歡的生長空間密度問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細胞，如果細胞形態(tài)不好，（或者細胞形態(tài)不清晰，表面似有異物等）可以在傳代的時候進行如下操作：首先，倒掉舊的培養(yǎng)基，加入3ml新的培養(yǎng)基（有無血清的都可）洗滌一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培養(yǎng)基，進行預(yù)吹打，控制吹打力度，輕輕地大概沿著瓶底過一遍，然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。（巨噬細胞建議只吹打，不消化）其次，把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內(nèi)，培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，按時間點觀察細胞貼壁情況。10分鐘觀察一次，20分鐘，30分鐘觀察一次。選擇一個時間點，已經(jīng)有部分細胞貼壁的情況下，重新置于潔凈臺，底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細胞生長情況以及形態(tài)。通常稱之為“二傳”。如果一次效果還不理想，可重復(fù)多次。直到找到細胞上乘形態(tài)。其中要注意，結(jié)合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數(shù)量長得好的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系
Kit225/K6 Thawing人T淋巴細胞系
細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分
因為細胞生長的時候肯定是要相互聯(lián)系，大部分的細胞都是要成片生長的，尤其是對于貼壁細胞，單個細胞貼壁之后長著長著就長到一片去了。但是如果是成片的細胞抱團的話，傳代后細胞是不能貼壁的，這樣抱團的細胞就會死亡。所以，消化傳代的時候一定要將細胞消化成單個單個的獨立狀態(tài)，這個啊是非常考究你的功夫的！細胞一旦脫落入懸液里你很難再將他吹打成單個，因為他沒有受力點了。很難找到受力點讓你對他吹打的力分散開細胞。所以必須要在細胞未脫落之前將其吹打開，受力點就是細胞貼壁的地方。這樣你就必須要嚴格控制好消化的程度啊，這和大師做飯掌握好火候是一樣的道理啊。既要消化到容易吹打下來，又不能太過，一吹就整片脫落，要單個單個地往下掉。所以我才要分批分次地加胰酶消化就是為了保證不同生長狀態(tài)貼壁程度的細胞能夠都維持在好的受力點分散開。這個是很重要的一點。尤其是對于某些細胞這一點就是他活去死的致命點。像Caco-２細胞就是如此。另外關(guān)于傳代很重要一點就是一定不能等到細胞長滿的時候才去消化傳代。要在細胞長到７０%左右的時候就要傳代了，一旦發(fā)現(xiàn)細胞生長中已經(jīng)有疊層生長的時候就要立即進行消化傳代。不能再拖了。關(guān)于換液傳代時候洗瓶的問題。對于用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)的細胞，你在洗的時候如果是用無血清１６４０去洗細胞在隨即后的幾次中會比用DMEM洗的長的要好。同樣，用１６４０培養(yǎng)的也有這個現(xiàn)象。如果不嫌麻煩的話，可以用PBS來洗，洗的效果和用無血清培養(yǎng)基洗的效果基本上是一樣的，對于有些細胞會更勝一籌。洗的目的主要是洗去培養(yǎng)瓶里殘留的血清，防止它對胰酶的影響。這樣能夠保證胰酶的消化能力優(yōu)先，是很關(guān)鍵的一點。先補充這么多，還會后續(xù)更新。再補充一點：傳代時PBS洗是很重要的一步，最近發(fā)現(xiàn)，用PBS就可以把細胞消化開來。加入PBS放置１０-１５分鐘，有些需要更長的時間，等到細胞一個個分離開來的時候，就可以直接吹打下來，但是和胰酶消化一樣，要控制好時間，不能時間太過了，要不然損傷細胞，細胞不容易成活，狀態(tài)容易不好。這個方法對于某些細胞是很管用的。有些細胞用胰酶消化不容易消化成單個的時候，或者臨時沒有胰酶了，可以選用此方法。不過一定要試試，看是否適合你的細胞。
細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書
MIN6細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH1568細胞、10RGB細胞、LS 123細胞
L Wnt-3A細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HANK1細胞、FRO細胞、Ball 1細胞
Hs-578-T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H2196細胞、OKa-C-1細胞、H-2228細胞
MDA-330細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SPC-A-1細胞、H87細胞、10RGB細胞
JB6 clone 30, subclone 7b細胞系相關(guān)產(chǎn)品：JB6 Cl 30細胞、RS4;11細胞、RC92A細胞
HOP-92細胞系相關(guān)產(chǎn)品：L-WRN細胞、SCC25細胞、LA-N-6細胞
UMNSAH/DF-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCM-460細胞、NCIH1666細胞、H-1993細胞
RL95-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Clone 166細胞、GM03570細胞、Molm 13細胞
MIA PaCa-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI H82細胞、SP2細胞、DoTc2-4510細胞
B958細胞系相關(guān)產(chǎn)品：J774A.1細胞、C4-2 Bone metastatic細胞、NCI-H2195細胞
Bac 1.2F5細胞系相關(guān)產(chǎn)品：130-T細胞、K422細胞、NTERA-2cl.D1細胞
SK-Mel1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PC-3M-2B4細胞、OVCAR-433細胞、Ketr3細胞
GTL16細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H1184細胞、H-1341細胞、MBVP細胞
SU-DHL1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs695細胞、HEC1B細胞、Mono-Mac-6細胞
NCI-H2444細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MPC-5細胞、GM12878細胞、HCCLM3細胞
RWPE-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：C 643細胞、NIH3T3細胞、Panc-03.27細胞
OCM1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CTV-1細胞、hTERTHME1細胞、CL-11細胞
TF1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NB1-RGB細胞、SHEP1細胞、BetaTC6細胞
MAC1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MuM-2B細胞、HCC-1428細胞、SACC-LM細胞
CATHa細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KMB17細胞、GM 637細胞、GM 637細胞
RMG-I細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HMCB細胞、C3H-10T1/2細胞、293T/17細胞
RMG-I細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HMCB細胞、C3H-10T1/2細胞、293T/17細胞
NCI-H1876細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-647細胞、RBL細胞、RKO細胞
DoTc2 4510細胞系相關(guān)產(chǎn)品：COLO201細胞、SACC-83細胞、T-47-D細胞
HK-2 [Human kidney]細胞系相關(guān)產(chǎn)品：University of Arizona Cell Culture-812細胞、KBM-7/Hap8細胞、H-522細胞
HuH28細胞系相關(guān)產(chǎn)品：IHH4細胞、LS 513細胞、PTK-2細胞
Kit225/K6 Thawing人T淋巴細胞系
RGB細胞系相關(guān)產(chǎn)品：RL細胞、LTEP a2細胞、SK-MES細胞
MDCC MSB1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MLA-144細胞、DoTc2-4510細胞、Porcine Kidney-13細胞
MARC 145細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CoCL2細胞、CP70細胞、T-T細胞
HSC-I細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H69細胞、Co 205細胞、HKC細胞
NCI-H747細胞系相關(guān)產(chǎn)品：C 6細胞、BIC-1細胞、MDAMB134VI細胞
NCI-SNU-216細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KPL4細胞、ANA-1細胞、H4-II-EC3細胞
KPL-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：GM2219C細胞、WC00044細胞、Hs 940.T細胞
CFSC-8B細胞系相關(guān)產(chǎn)品：L-6 myoblast細胞、HCAEC細胞、M20 [Human melanoma]細胞
H-2347細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Anglne細胞、WM-239細胞、TCC Sup細胞
MV4;11細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Transformed Human Liver Epithelial-2細胞、LICR-HN6細胞、PA1細胞
MDAMB231細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MUTZ-1細胞、PANC-08-13細胞、H128細胞
Mel-MeWo細胞系相關(guān)產(chǎn)品：UK Pan-1細胞、K562細胞、P3HR1-BL細胞
NCI-H1568細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MC26細胞、H2030細胞、D-283 Med細胞
HL60細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MT-3 [Human leukocytes]細胞、Farage細胞、MDA MB 436細胞
H2170細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MBdSMC細胞、IM95細胞、MADB 106細胞
MOLT 4細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H676B細胞、NBLAN5T細胞、TMK-1細胞
OV1063細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KYSE-30細胞、Colon38細胞、KMS-18細胞
OsACL細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Instituto Biologico-Rim Suino-2細胞、LU65細胞、SUM-159-PT細胞
SJ-Rh 30細胞系相關(guān)產(chǎn)品：LLC PK1細胞、H716細胞、RKN細胞
NOR-10細胞系相關(guān)產(chǎn)品：ROS-17/2.8細胞、H146細胞、SKNFI細胞
KMST-6細胞系相關(guān)產(chǎn)品：DF-1細胞、TK+/- (clone 3.7.2C)細胞、NCIH441細胞
EAhy926細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs.27細胞、C-33 A細胞、NCI-322細胞
SW 1088細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NTera2/D1細胞、Hs888T細胞、ECV 304細胞
CPAE細胞系相關(guān)產(chǎn)品：OSRC2細胞、LS411細胞、SW48細胞
NCI-H441-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H1975細胞、BNL.1ME A.7R.1細胞、Human Corneal Endothelial Cells-12細胞
MTEC1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC-1833細胞、Vero 76 clone E6細胞、HS-294細胞
BALB/c 3T3 clone A31細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SVHUC細胞、SUM-159細胞、H-1573細胞
SkChA-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CMT93細胞、Human ErythroLeukemia細胞、H-211細胞
KRC Y細胞系相關(guān)產(chǎn)品：L540細胞、B-95-8細胞、McG-1細胞
BAR-T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HEK-293F細胞、H22-H8D8細胞、CWR-22rv1細胞
RWPE2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-8細胞、DMS 153細胞、SCLC21H細胞
WIL2S細胞系相關(guān)產(chǎn)品：TGW細胞、HOC細胞、SF-539細胞
LICR-HN-6細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MB468細胞、38C-13細胞、Roswell Park Memorial Institute 6666細胞
Kit225/K6 Thawing人T淋巴細胞系
LS-123細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs 739.T細胞、HEK293-F細胞、H2330細胞
H520細胞系相關(guān)產(chǎn)品：EoL-1 cell細胞、NCIH660細胞、MLA-144細胞
ST-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SW 756細胞、HEK-293-H細胞、JOSK-M細胞
Hs606細胞系相關(guān)產(chǎn)品：JHH7細胞、HDMEC細胞、Panc 8.13細胞
SK-Hep1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hepatoma 22細胞、YH細胞、Mink Lung細胞
SK HEP 01細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HcaF細胞、Wien-133細胞、CAMA-1細胞
MFE 296細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK UT 1細胞、RPMI-7666細胞、NCI-SNU-1040細胞
OCI AML4細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CCRF細胞、H-1770細胞、T-HEECs細胞
WC00097細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC0202細胞、MFE-296細胞、SEM細胞
C38細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SUDHL1細胞、NCI-H441-4細胞、RBL 2H3細胞
MV522細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PANC-28細胞、MCF-10A細胞、JROECL 33細胞
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