"EB2 Lymphoblastoid cells人B淋巴細胞瘤細胞系 細胞背景資料:詳見相關(guān)文獻介紹 細胞形態(tài):淋巴母細胞樣 細胞復蘇相關(guān)注意事項:1.取細胞的過程中注意帶好防凍手套,護目鏡。此項尤為重要,細胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識,在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對細胞不是完全無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復蘇溫度太慢,會造成細胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng),第二天換液。因為離心的目的是兩個,去除DMSO,去除死細胞,這個是標準流程,但對一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間,轉(zhuǎn)的不夠活細胞沉底的少,細胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細胞會受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復蘇,結(jié)果無異常。5.細胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗中的經(jīng)驗總結(jié)為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。6.復蘇細胞分裝的問題:試驗中我的經(jīng)驗總結(jié)為復蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細胞濃度過低,不利于細胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會比較大,就會影響細胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵毎麤]有什么影響,還有一個說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。 NCI-H1930細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TCC Sup細胞、Hs695細胞、NCI-H1793細胞 KNS-42細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P-388D1細胞、mRMEC細胞、T47-D細胞 Mv 1 Lu (NBL-7)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BCaP 37細胞、H-1944細胞、NCI-UMC-11細胞 細胞生長:懸浮 EB2 Lymphoblastoid cells人B淋巴細胞瘤細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 為了防止因污染或技術(shù)原因使長期培養(yǎng)功虧一簣,考慮到培養(yǎng)細胞因傳代而遲早會出現(xiàn)變異,有時因寄贈、交換和購買,培養(yǎng)細胞從一個實驗室轉(zhuǎn)運到另一個實驗室,的策略是進行低溫保存。這對于維持一些特殊細胞株的遺傳特性極為重要?,F(xiàn)簡要介紹深低溫保存法(-70℃~-196℃)的特點。細胞深低溫保存的基本原理是:在-70℃以下時,細胞內(nèi)的酶活性均己停止,即代謝處于完全停止狀態(tài),故可以長期保存。細胞低溫保存的關(guān)鍵,在于通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內(nèi),水晶呈針狀,極易招致細胞的嚴重損傷。凍存細胞的復蘇:凍存細胞較脆弱,要輕柔操作。凍存細胞要快速融化,并直接加入完全生長培養(yǎng)基中。若細胞對凍存劑(DMSO或甘油)敏感,離心去除凍存培養(yǎng)基,然后加入完全生長培養(yǎng)基中。直接鋪板方法:取出貯存細胞,37℃水浴中快速融化;直接用完全生長培養(yǎng)基鋪板細胞。1ml凍存細胞使用10~20ml完全生長培養(yǎng)基。進行活細胞計數(shù),細胞接種應該至少在3×10(5)活細胞/ml;培養(yǎng)細胞12到24小時,更換新鮮的完全生長培養(yǎng)基,去除凍存劑。離心方法:取出貯存細胞,37℃水浴中快速融化;把1到2ml凍存細胞加入到大約25ml完全生長培養(yǎng)基,輕輕混勻;以大約80x離心2到3分鐘;棄去上清。在完全生長培養(yǎng)基輕輕再次懸浮細胞,并且進行活細胞計數(shù)。細胞鋪板,細胞接種應該至少為3×10(5)活細胞/ml。細胞的分化:一個成年人全身細胞總數(shù)約1012個,可以區(qū)分為200多種不同類型的細胞:形態(tài)結(jié)構(gòu),代謝,行為,功能等各不相同。追根溯源,這么多種細胞均來自一個受精卵細胞。所以,通常把發(fā)育過程中,細胞后代在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生差異的過程稱為細胞分化。細胞分化發(fā)生在胚胎階段,也發(fā)生在胎兒出生以后,乃至成人階段。例如,人體血細胞的產(chǎn)生和分化,這個過程在人的一生中一直持續(xù)著。由旺盛生長不斷分裂的細胞,轉(zhuǎn)入分化,通常從細胞周期中G1期開始時一個確定的點G0點“逃逸”出細胞周期。旺盛生長分裂的細胞和各種分化了的細胞,它們的基因表達和代謝活動各不相同。 細胞傳代方法:4 X 105 cells/mL and maintain at between 4 X 105 and 1 X 106 cells/mL.,每2-3天換液 HELA-GFP細胞系相關(guān)產(chǎn)品:251MG細胞、NCI-128細胞、HuPT4細胞 EFM-19細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKMES細胞、RD-ES細胞、HT-115細胞 SU-DHL-10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BC-020細胞、Rat-2細胞、NCIH2170細胞 HCC1500細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OEC33細胞、HTR-8/SV neo細胞、H1417細胞 HCC-1359細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM-159PT細胞、NIH:OVCAR-4細胞、Karpas-299細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 EB2 Lymphoblastoid cells人B淋巴細胞瘤細胞系 細胞生長特性:懸浮生長 細胞形態(tài)特性:淋巴母細胞樣 培養(yǎng)細胞真的不難,最關(guān)鍵幾點:1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進口的,真的很難相信你會把細胞養(yǎng)壞;2)動作要快,胰酶消化,換液什么,細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時間,所謂的細胞狀態(tài)差,很多時候是傳代的原因;3)有時間的話,需要細胞計數(shù),傳相應數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細胞的生長曲線,不會臨時要處理,手足無措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時間,傳代細胞的實驗穿插進行,可以節(jié)省很多時間,也不會耽誤別人的實驗;5)個人的實驗器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細胞不能進去太多人,避免相互干擾。每天對待細胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細胞時有哪些經(jīng)驗教訓可以分享呢?1)嚴格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準備一套;3)有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測;4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟,勤換(滅菌水加進去);5)晚上離開的時候給傳代細胞照紫外,超凈臺是用完就開;6)是同一時間就你一個人在用傳代細胞在養(yǎng)細胞。 NCTC929細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OAW-42細胞、GM07404細胞、SK-N-BE(1)n細胞 NCI-747細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ramos-2G6-4C10細胞、CHG5細胞、FRO81-2細胞 SACC-LM細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HIEC6細胞、HCC-1187細胞、Tu-177細胞 HEI193細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DLD1細胞、138MG細胞、UMNSAH/DF-1細胞 SK-OV-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM-239-A細胞、TCMK1細胞、NCIH2405細胞 Mv1Lu細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3X63-Ag8.653細胞、KU-812細胞、BIU-87細胞 KMM-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MCF12F細胞、RPMI 2650細胞、CCRFCEM細胞 Hep-3B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs445細胞、T24細胞、HOS/MNNG細胞 PBL細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H35細胞、RAW 264.7細胞、MA-782細胞 LLC-WRC 256細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuNS1細胞、HEEpiC細胞、MHCC-LM3細胞 EB2 Lymphoblastoid cells人B淋巴細胞瘤細胞系 HEK293A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NK62a細胞、Panc 4.03細胞、L-540細胞 IAR 20細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NG-108-15細胞、N9細胞、293 F細胞 HSC-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMC細胞、COLO 679細胞、SK-N-BE細胞 BALL-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HepG2細胞、SACC-LM細胞、LCLC-103H細胞 OVCA432_Bast細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-A549細胞、130-T細胞、SW-1271細胞 MGH-U1 (EJ)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Lewis lung carcinoma line 1細胞、HBL-100細胞、H1436細胞 MGH-U1 (EJ)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Lewis lung carcinoma line 1細胞、HBL-100細胞、H1436細胞 SF-763細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCRF SB細胞、RH8994細胞、L cell line細胞 C666-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AM細胞、WI-38細胞、AU-Mel細胞 GA-10-Clone-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MGH-U3細胞、NCIH2135細胞、SKLMS-1細胞 C 643細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPC-TW 01細胞、HTh74細胞、MDA-453細胞 130-T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:G361-mel細胞、Pt-K2細胞、SUM 159PT細胞 NCIH522細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Pa16C細胞、CAL 120細胞、OVCAR433細胞 SJRH-30細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC3T3-E1 Subclone 14細胞、746T細胞、SuDHL 4細胞 NS20-Y細胞系相關(guān)產(chǎn)品:F442-A細胞、HeLa229細胞、FM-88細胞 MUM2B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:EL4細胞、H-187細胞、KP-N-RT-BM-1細胞 MDA-MB 361細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Roswell Park Memorial Institute 6666細胞、HUASMC細胞、SF-126細胞 HT3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FDC-P1細胞、HEK293EBNA細胞、OK細胞 PLA801C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MBT-2細胞、CCD-19Lu細胞、Experimental Mammary Tumour-6細胞 NRK clone 52E細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PBL細胞、ARO81細胞、NIH:OVCAR-5細胞 HRIF細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CV-1細胞、Madin-Darby Bovine Kidney細胞、MCF-10A細胞 HCASMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NR-8383細胞、J-774細胞、MA-104細胞 LAN-6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H82sclc細胞、207細胞、CFPAC細胞 HS 1.Tes細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MCFs細胞、NCI-747細胞、NCI-H-69細胞 D-324MED細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SF 539細胞、A-875細胞、OE-33細胞 NIE 115細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16-F10-BL6細胞、Bac1 2F5細胞、NCIH1395細胞 HS-729細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Murine Long bone Osteocyte-Y4細胞、SKNMC細胞、RPMI 6666細胞 PFSK-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GT38細胞、Tu-212細胞、Roswell Park Memorial Institute 8402細胞 HCE細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEC-1-A細胞、SMA560細胞、LUDLU-1細胞 DR2R1610細胞系相關(guān)產(chǎn)品:253J細胞、50.B1細胞、Tregs細胞 NCI-H1869細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LS-1034細胞、ssMCF7細胞、TGHAVSMC細胞 SMA560細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Kit 225 K6細胞、CEM/0細胞、PECAPJ34細胞 COLO-741細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPAF2細胞、Swiss/3T3細胞、MDA-435細胞 H-2444細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL85-1細胞、PA-1細胞、NCI-H1341細胞 MCF-7/ADR細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL 62細胞、CRFK細胞、SCC9細胞 NCI-H1155細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-146細胞、MDCK-II細胞、RSMC細胞 HDSMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LTEPsm細胞、MHH-CALL-2細胞、Kit 225-K6細胞 EFO 27細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TU 686細胞、Kit-225細胞、JB6 [Mouse]細胞 HELA-GFP細胞系相關(guān)產(chǎn)品:251MG細胞、NCI-128細胞、HuPT4細胞 MDAMB468細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT1080細胞、BC-023細胞、IM9細胞 HCE細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEC-1-A細胞、SMA560細胞、LUDLU-1細胞 HD11細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM05887細胞、RPMI-6666細胞、SKNDZ細胞 HCCC-9810細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ES2細胞、CAL-148細胞、MDA-MB-231細胞 FLC7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM00346B細胞、OVCAR8細胞、Nb2細胞 HEK 293FT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CBRH7919細胞、HBE細胞、IAR 20細胞 GTL16細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1184細胞、H-1341細胞、MBVP細胞 SF 763細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM2131細胞、RD細胞、HT-29細胞 J82 COT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE-1細胞、Namalva細胞、NCIH196細胞 HNE2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKN-AS細胞、Panc-05.04細胞、HPAEC細胞 NCI-H2444細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MPC-5細胞、NCI-H2009細胞、KPL4細胞 NCIH211細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NIH:OVCAR-10細胞、MDA-361細胞、NCI-H740細胞 EB2 Lymphoblastoid cells人B淋巴細胞瘤細胞系 hOMF細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Nthy ori 3.1細胞、JM-1細胞、OV 2008細胞 138 MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-9724細胞、MCA38細胞、293S細胞 GM03671C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:JTC-28細胞、LTEP-s細胞、Colo741細胞 SACC-LM細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HIEC6細胞、CD18細胞、Factor Dependent Cell-Paterson 1細胞 "
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