"NCI-BL1339 Lymphoblastoid cells人B淋巴細胞系 細胞背景資料:詳見相關(guān)文獻介紹 細胞形態(tài):淋巴母細胞樣 正確的細胞復蘇需知事項:細胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯,就是記得到時間了,拿出來復蘇。那么,細胞復蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細胞:補充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。在細胞長至70%單層時收獲細胞,計數(shù)活細胞數(shù),用凍存液調(diào)整細胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時)內(nèi)凍存和復蘇。在凍存管上標記好細胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細胞,以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題!細胞正確的復蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點:當從液氮罐內(nèi)取出細胞時,有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護面罩和防護服十分必要;其實,細胞復蘇只是一個簡單的實驗,不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節(jié),不然,也不一定會盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護目鏡;盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。 JOSK-M細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKNO-1細胞、Colo699細胞、HcaF細胞 TH1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A9(Hamprecht)細胞、Large Cell Lung Cancer-103H細胞、SC1細胞 HCC1428細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P-388細胞、CTLL-2細胞、NR8383.1細胞 細胞生長:懸浮 NCI-BL1339 Lymphoblastoid cells人B淋巴細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 血清必須貯存于–20~-70℃,若存放于4℃,請勿超過一個月。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中,由于血清結(jié)凍時體積會增加約10%,必須預(yù)留此膨脹體積之空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。一般廠商提供之血清為無菌,不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,勿直接過濾血清。瓶裝(500ml)血清解凍步驟(逐步解凍法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室溫下全溶后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。勿將血清置于37℃太久,若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會因此受到破壞,而影響血清之品質(zhì)。血清凝絮物:發(fā)生之原因有許多種,但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成,這些凝絮沈淀物不會影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物,可用離心3000rpm,5min去除,或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沈淀物,因為會阻塞過濾膜。顯微鏡下觀察之“小黑點”:通常經(jīng)過熱處理之血清,沈淀物的形成會顯著的增多。有些沈淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”,常會誤認為血清遭受污染,而將血清放在37℃中欲培養(yǎng)此“微生物”,但在37℃環(huán)境下,又會使此沈淀物增多,更會誤認為微生物之增殖,但以培養(yǎng)細菌之培養(yǎng)基檢測,又沒有污染。一般而言,此小黑點應(yīng)不會影響細胞之生長,但若懷疑此血清之品質(zhì),應(yīng)立即停用,更換另一批號的血清。 細胞傳代方法:3-4天換液1次。 3T3F442A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Microbiological Associates-104細胞、JB-6 Cl 30細胞、NWA細胞 Renal Carcinoma細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LNCaP subline C4-2細胞、H9c2細胞、Hs 888.T細胞 KYSE-450細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MHHCALL2細胞、LA-N-1細胞、SW480細胞 SUDHL1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GC-1 spg細胞、ZR7530細胞、Huh 7.5.1細胞 BNL.1ME A.7R.1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H740細胞、NCI-SNU-C1細胞、3T3-Swiss albino細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 NCI-BL1339 Lymphoblastoid cells人B淋巴細胞系 細胞生長特性:懸浮生長 細胞形態(tài)特性:淋巴母細胞樣 常見細胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會對細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因為含量過低會導致細胞營養(yǎng)不足,過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時須更換培養(yǎng)基?視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進行更換;3)購買的復蘇細胞,為何會有脫落?因為運輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷,以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當,造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 MN-9D細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mono Mac6細胞、BT549細胞、H-2405細胞 OVCAR8/ADR細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CTLA4 Ig-24細胞、RBL-2H3細胞、LN229細胞 THP-1(ATCC)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:J.E6-1細胞、BLO-11細胞、Vero 76細胞 N1S1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NTera2 cl.D1細胞、373MG細胞、RCF細胞 SUM159PT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DMS153細胞、KMH2細胞、BJA-B-1細胞 KYSE0520細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Caki-1細胞、RM-1細胞、S16細胞 KOSC-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OAW42細胞、Mel-MeWo細胞、T-ALL-1細胞 LAC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SGC 7901細胞、CFSC-8B細胞、Panc 5.04細胞 H345細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPC-TW039細胞、UMR106細胞、P3-X63-Ag8細胞 BHT101細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NBL-7細胞、MB231細胞、UMUC-3細胞 NCI-BL1339 Lymphoblastoid cells人B淋巴細胞系 McG-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Y3.AG.1.2.3細胞、HPDEC細胞、ECV-304細胞 High-5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH446細胞、CL-40細胞、HCC-1359細胞 JM-Jurkat細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PFSK-1細胞、TE85細胞、Hs274T細胞 H-2108細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK;293細胞、KM932細胞、HS578細胞 GDM-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MCF7-GFP細胞、B16 melanoma F10細胞、UWB1289細胞 H220細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-676細胞、L cells細胞、EL 4細胞 H220細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-676細胞、L cells細胞、EL 4細胞 MSB1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LIPF178C細胞、HGC-27細胞、KPL1細胞 NCI-H735細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCA433細胞、MES-SA Dx5細胞、OsACL細胞 Hs888 Lu細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NE-4C細胞、NTERA-2 cl.D1細胞、Ca9-22細胞 NCI-H1770細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKGIIIA細胞、HuH28細胞、TK.10細胞 KY70細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC3T3-E1 Subclone 4細胞、SNU398細胞、Malme-3M細胞 B16/F10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc_05_04細胞、CAL 39細胞、HCC366細胞 CAL-27細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL-51細胞、My-La 2059細胞、NCI-747細胞 Mouse podocyte細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PANC 813細胞、MEC-1細胞、L5178Y-R細胞 T98細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUPB-15細胞、CF PAC-1細胞、MV-4-11細胞 Tn5B1-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC-2 [Human pancreatic carcinoma]細胞、B16/F10細胞、RCC10RGB細胞 WERI-Rb1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GCT細胞、Human Intestinal Epithelial Cell-6細胞、CAOV3細胞 Hs746T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEMC1細胞、TE-6細胞、U-87細胞 Hs746T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEMC1細胞、TE-6細胞、U-87細胞 CT 26細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI/ADR-RES細胞、CMT 64細胞、GM-346細胞 LCLC-103H細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mouse Forestomach Carcinoma細胞、RPMI 7666細胞、PA-TU-8988S細胞 MUGCHOR1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:no.11細胞、HCCC-9810細胞、WIL2S細胞 Hs 683.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TPC1細胞、RPTC細胞、HS5細胞 293AD細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AHH-1細胞、GC-1spg細胞、UCLA-SO-14細胞 SW.620細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM-215細胞、MCCAR細胞、SK-NMC細胞 SW-579細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI/AML3細胞、M-G63細胞、MAVER細胞 NP69細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-2023細胞、LM(TK-)細胞、NCI-H1573細胞 HEK 293FT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CBRH7919細胞、HBE細胞、IAR 20細胞 HCGC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BC3H-1細胞、PG-BE1細胞、OCUM-1細胞 LS1034細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NRK-52E細胞、NCL-H548細胞、SK-N-F1細胞 32D:cl3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Farage OL細胞、LS174細胞、HepG2/C3A細胞 SACCLM細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK 293細胞、HCT/Taxo1細胞、Det. 562細胞 T9細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PLA801D細胞、CWR22-R1細胞、NCIH250細胞 OCI-Ly 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE8細胞、RGCs細胞、A549 ATCC細胞 MDA-MB-436細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCRF/CEM/0細胞、MRASMC細胞、SCC090細胞 HuPT4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC-38細胞、Loucy細胞、SJSA1細胞 H2081細胞系相關(guān)產(chǎn)品:hFOB細胞、NCI-H2171細胞、CP70細胞 H2081細胞系相關(guān)產(chǎn)品:hFOB細胞、NCI-H2171細胞、CP70細胞 Normal fibroblast-10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:58F細胞、PNT1A細胞、JVM-2細胞 IB-RS-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CNE細胞、RIMEC細胞、MDA-MB-435-S細胞 L540細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MES-SA/Dx5細胞、P31 FUJ細胞、RS(4;11)細胞 Hs294細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HIT細胞、COLO 201細胞、MDA-MB435細胞 Shadyside Hospital Pittsburgh-77細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H9c2 (2-1)細胞、R1800[RA]細胞、M059K細胞 HANK-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPAF-II/CD18細胞、Hs274T細胞、NCI-H1618細胞 HNE-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK ES 01細胞、SK 1細胞、HOS-MNNG細胞 PC3-M細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 611.T細胞、H-647細胞、HO-8910細胞 HepaRG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Sp2/O細胞、HRVEC細胞、HEMCSS細胞 HS 445T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA.MB.435細胞、PK15細胞、L-cells細胞 AR41P細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW527細胞、P3/X63/Ag8.653細胞、EC-GI-10細胞 WI-38細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RD細胞、LMTK-細胞、OCI-AML3細胞 NCI-BL1339 Lymphoblastoid cells人B淋巴細胞系 HRC-99細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CW-2細胞、HA1800細胞、MO59J細胞 LN382細胞系相關(guān)產(chǎn)品:526mel細胞、NCI-H28細胞、LN-382細胞 PL-45細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KPNRTBM1細胞、MN60細胞、HCa/16A3-F細胞 THP-1(ATCC)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:J.E6-1細胞、HUT 125細胞、Caco-2 BBe細胞 "
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