"IPEC-1 epithelioid cells豬小腸上皮細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:小腸;上皮細(xì)胞;自發(fā)永生 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞復(fù)蘇后貼壁細(xì)胞較少的問(wèn)題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過(guò)程沒(méi)有問(wèn)題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問(wèn)題,還有確信拿來(lái)的細(xì)胞沒(méi)問(wèn)題??偨Y(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實(shí)際上復(fù)蘇出問(wèn)題的可能非常小,因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單,而且死板。1、你凍存的時(shí)候是不是消化的時(shí)間過(guò)長(zhǎng),這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個(gè)問(wèn)題,太長(zhǎng)的消化時(shí)間會(huì)讓細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時(shí)候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會(huì)死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過(guò)7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時(shí)候是不是把DMSO混均勻,這個(gè)有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個(gè)事情,因?yàn)檫@個(gè)東西流程長(zhǎng)。6、如果你細(xì)胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個(gè)角度講建議去除離心這步。7、你的細(xì)胞在凍存前是否過(guò)密。還有,不贊成孵箱污染這個(gè)概念的,所有在一個(gè)孵箱里的細(xì)胞都污染一個(gè)細(xì)菌的話,這個(gè)細(xì)菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因?yàn)榉跸錈o(wú)論你如何處理都有大量的細(xì)菌,問(wèn)題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問(wèn)題,這個(gè)很重要,不能靠猜,否則你就有可能細(xì)胞養(yǎng)絕最后換課題,這個(gè)見(jiàn)得太多了,別不當(dāng)會(huì)事。 Line 870 Emory University-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD841CoTr細(xì)胞、U343細(xì)胞、Wien-133細(xì)胞 PLA801-95C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-HUT-292細(xì)胞、SK Mel 1細(xì)胞、H841細(xì)胞 Nakata-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2172細(xì)胞、JVM-2細(xì)胞、NCIADRRES細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 IPEC-1 epithelioid cells豬小腸上皮細(xì)胞系 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 血清必須貯存于–20~-70℃,若存放于4℃,請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。如果一次無(wú)法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無(wú)菌50ml離心管中,由于血清結(jié)凍時(shí)體積會(huì)增加約10%,必須預(yù)留此膨脹體積之空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。一般廠商提供之血清為無(wú)菌,不需再無(wú)菌過(guò)濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾,勿直接過(guò)濾血清。瓶裝(500ml)血清解凍步驟(逐步解凍法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室溫下全溶后再分裝,一般以50ml無(wú)菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。勿將血清置于37℃太久,若在37℃放置太久,血清會(huì)變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會(huì)因此受到破壞,而影響血清之品質(zhì)。血清凝絮物:發(fā)生之原因有許多種,但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成,這些凝絮沈淀物不會(huì)影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物,可用離心3000rpm,5min去除,或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過(guò)濾。不建議用過(guò)濾步驟去除這些凝絮沈淀物,因?yàn)闀?huì)阻塞過(guò)濾膜。顯微鏡下觀察之“小黑點(diǎn)”:通常經(jīng)過(guò)熱處理之血清,沈淀物的形成會(huì)顯著的增多。有些沈淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點(diǎn)”,常會(huì)誤認(rèn)為血清遭受污染,而將血清放在37℃中欲培養(yǎng)此“微生物”,但在37℃環(huán)境下,又會(huì)使此沈淀物增多,更會(huì)誤認(rèn)為微生物之增殖,但以培養(yǎng)細(xì)菌之培養(yǎng)基檢測(cè),又沒(méi)有污染。一般而言,此小黑點(diǎn)應(yīng)不會(huì)影響細(xì)胞之生長(zhǎng),但若懷疑此血清之品質(zhì),應(yīng)立即停用,更換另一批號(hào)的血清。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 SK-N-BE2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNT8細(xì)胞、NCI-H676B細(xì)胞、SUM159細(xì)胞 BTT739細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-937細(xì)胞、H1869細(xì)胞、My-La 2059細(xì)胞 LS 513細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H292細(xì)胞、Molm14細(xì)胞、XuanWei Lung Cancer-05細(xì)胞 MM1.S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TKB1細(xì)胞、LM8細(xì)胞、V-79細(xì)胞 HuT78細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3J HR1-K細(xì)胞、MHCC 97細(xì)胞、TALL-1 [Human adult T-ALL]細(xì)胞 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 IPEC-1 epithelioid cells豬小腸上皮細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)問(wèn)題總結(jié):1)一般客戶拿到細(xì)胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細(xì)胞后先不開(kāi)蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開(kāi)封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過(guò)80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過(guò)80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。細(xì)胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細(xì)胞多久能到,是寄凍存的細(xì)胞還是復(fù)蘇好的細(xì)胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細(xì)胞前請(qǐng)確認(rèn)當(dāng)?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細(xì)胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng),造成細(xì)胞無(wú)法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。 COLO 205細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H4-II-E細(xì)胞、SUM 102PT細(xì)胞、COLO_320DM細(xì)胞 MSTO-211 H細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1666細(xì)胞、L5178Y-R細(xì)胞、Intestinal Porcine Epithelial Cell line-J2細(xì)胞 293H細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SMC-1細(xì)胞、HEK (AD293)細(xì)胞、MSB-1細(xì)胞 174xCEM.T2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H446細(xì)胞、GA10細(xì)胞、H-460細(xì)胞 C2-C12細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AQ-Mel細(xì)胞、WEHI3細(xì)胞、KYSE-450細(xì)胞 TSCCa細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UWB1-289細(xì)胞、Hs 863.T細(xì)胞、OCI-LY-8細(xì)胞 H-660細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3X63細(xì)胞、WM266mel細(xì)胞、Y3-Ag123細(xì)胞 NG108-15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MRAEC細(xì)胞、Centre Antoine Lacassagne-78細(xì)胞、AA-Mel細(xì)胞 Hs606T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FL-83B細(xì)胞、H322細(xì)胞、HCC2935細(xì)胞 NCI-H2087細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW962細(xì)胞、2B4細(xì)胞、KYSE30細(xì)胞 IPEC-1 epithelioid cells豬小腸上皮細(xì)胞系 2BS細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:alphaTC1 Clone 6細(xì)胞、NCI-H2030細(xì)胞、H69細(xì)胞 HCC1954-BL細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK-A細(xì)胞、SK-MEL-3細(xì)胞、MyLa 2059細(xì)胞 RK13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCLP1細(xì)胞、AMJ2C8細(xì)胞、H-2444細(xì)胞 HEL9217細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Kato-III細(xì)胞、H1836細(xì)胞、TE 85.T細(xì)胞 BaF3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ECV304細(xì)胞、NCIH526細(xì)胞、H-1437細(xì)胞 HEK293E細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI-7951細(xì)胞、H920細(xì)胞、Tn-5B1-4細(xì)胞 HEK293E細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI-7951細(xì)胞、H920細(xì)胞、Tn-5B1-4細(xì)胞 CoCL3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1355細(xì)胞、H2228細(xì)胞、T-ALL1細(xì)胞 NTC-200細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc-05.04細(xì)胞、MDAMB-231細(xì)胞、K7M2 wt細(xì)胞 EU-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE-11細(xì)胞、Roswell Park Memorial Institute 7951細(xì)胞、NCI-H1404細(xì)胞 Walker/LLC-WRC256細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:INS1-E細(xì)胞、CL1-0細(xì)胞、Vero 76 clone E-6細(xì)胞 BT-483細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C8161細(xì)胞、JROECL33細(xì)胞、U-87-MG細(xì)胞 CFSC-8B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-6 myoblast細(xì)胞、HCAEC細(xì)胞、M20 [Human melanoma]細(xì)胞 BMSCs(mBMSCs)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-2OS細(xì)胞、Cloudman S91 melanoma細(xì)胞、BALB/3T3 (clone A31)細(xì)胞 KM H-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1838細(xì)胞、Kit 225細(xì)胞、AZ521細(xì)胞 SY5Y細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DBTRG-05MG細(xì)胞、BHT-101細(xì)胞、TE11細(xì)胞 3 LL細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UM-UC14細(xì)胞、NCI-H1954細(xì)胞、GM03671細(xì)胞 MRC-V細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Human Pancreatic Duct Epithelial細(xì)胞、HSC 3細(xì)胞、HO8910細(xì)胞 RBL2H3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:b.End3細(xì)胞、NCTC 929細(xì)胞、NCI-SNU-449細(xì)胞 RBL2H3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:b.End3細(xì)胞、NCTC 929細(xì)胞、NCI-SNU-449細(xì)胞 SCC090細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A673細(xì)胞、MOLM13細(xì)胞、Lewis Lung細(xì)胞 HT-1080細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AMJ2C8細(xì)胞、Capan-2細(xì)胞、U266細(xì)胞 32Dcl3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NIH3T3細(xì)胞、A 2780 CP細(xì)胞、WPMY-1細(xì)胞 SNU-878細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HR8348細(xì)胞、OCI-Ly 1細(xì)胞、NCI-SNU-878細(xì)胞 RSC-96細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKRC-52細(xì)胞、769-P細(xì)胞、SUM 52PE細(xì)胞 ME16C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H250細(xì)胞、Hs-611-T細(xì)胞、3T3J2細(xì)胞 BV173細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RGC-5細(xì)胞、RBL.2H3細(xì)胞、HS-445細(xì)胞 CFPAC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PJ34細(xì)胞、143B TK-細(xì)胞、G-402細(xì)胞 MIA PaCa-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI H82細(xì)胞、SP2細(xì)胞、DoTc2-4510細(xì)胞 CT26WT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RAW-264.7細(xì)胞、hRMECs細(xì)胞、P3JHR-1細(xì)胞 REC 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-4006細(xì)胞、U266B1細(xì)胞、HOS (TE85, Clone F5)細(xì)胞 Hs-343-T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FL83B細(xì)胞、RCK-8細(xì)胞、HCT FET細(xì)胞 NU-GC-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MGC803細(xì)胞、ACCM細(xì)胞、MC 116細(xì)胞 RCF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HA細(xì)胞、Malme-3 M細(xì)胞、MRASMC細(xì)胞 SNU-407細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-44細(xì)胞、SK UT 1細(xì)胞、TE-1細(xì)胞 NCI-H2286細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SBC-5細(xì)胞、OVCAR.4細(xì)胞、NTera2/D1細(xì)胞 HCC1187細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ARIP細(xì)胞、BNL.CL2細(xì)胞、MM6細(xì)胞 H64細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EC109細(xì)胞、NCI H82細(xì)胞、PLC PRF 5細(xì)胞 COLO829細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS-695T細(xì)胞、L-02細(xì)胞、H341細(xì)胞 HMEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BE(2)-M17細(xì)胞、SKGT4細(xì)胞、QGP 1細(xì)胞 Hmy.2 CIR細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Balb/c3T3細(xì)胞、NE1細(xì)胞、KYSE 450細(xì)胞 UPCI-SCC-154細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C-28/I2細(xì)胞、NCIH209細(xì)胞、WM-115細(xì)胞 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