"SVG p12 epithelioid cells人星形膠質(zhì)細胞系 細胞背景資料:星形膠質(zhì)細胞;SV40轉(zhuǎn)化;男性 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項:1.取細胞的過程中注意帶好防凍手套,護目鏡。此項尤為重要,細胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識,在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對細胞不是完全無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢,會造成細胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng),第二天換液。因為離心的目的是兩個,去除DMSO,去除死細胞,這個是標準流程,但對一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間,轉(zhuǎn)的不夠活細胞沉底的少,細胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細胞會受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復(fù)蘇,結(jié)果無異常。5.細胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗中的經(jīng)驗總結(jié)為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。6.復(fù)蘇細胞分裝的問題:試驗中我的經(jīng)驗總結(jié)為復(fù)蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細胞濃度過低,不利于細胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會比較大,就會影響細胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵毎麤]有什么影響,還有一個說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。 BC3 H1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs-27細胞、Los Angeles Prostate Cancer-4細胞、LAC細胞 RBSMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LNCaP-C4-2細胞、MDA MB231細胞、HFT 8810細胞 MeT-5A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-549細胞、SK-ES1細胞、PANC 327細胞 細胞生長:貼壁 SVG p12 epithelioid cells人星形膠質(zhì)細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 冷凍細胞解凍程序:依據(jù)細胞株數(shù)據(jù)單指定之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它指定之成份和比例,制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類,若因?qū)嶒炐枰仨氂兴煌瑫r,務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成,確定細胞適應(yīng)后,方進行所需之實驗。FBS(fetal bovine serum,胚牛血清), CS(calf serum,小牛血清)和HS(horse serum,馬血清),對細胞而言差異極大,請務(wù)必依據(jù)細胞株資料單指定之血清種類培養(yǎng)之。將培養(yǎng)基置于37°C水槽中回溫,回溫后噴以70%酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內(nèi)。取出冷凍管,立即放入37°C水槽中快速解凍,水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿,否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化后,以70%ethanol擦拭冷凍管外部,移入無菌操作臺內(nèi)。依據(jù)細胞種類和濃度,于無菌操作臺內(nèi)?。保癿l培養(yǎng)基加至T25或T75flask中。取出已解凍之細胞懸浮液,緩緩加入T25或T75flask內(nèi)之培養(yǎng)基,混合均勻,放入37°C,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。對絕大多數(shù)細胞而言,1%以下之冷凍保護劑DMSO,不會對細胞之貼附或活化有不良影響,不需立刻由解凍細胞中去除,待第二天確定細胞生長或貼附良好后再去除即可。惟對極少數(shù)因?qū)MSO敏感或會造成細胞分化之細胞,需立即去除DMSO者,則可將解凍后之細胞懸浮液放入5-10ml培養(yǎng)基中,離心300xg(約1000rpm),5分鐘,小心移去上清液,加入適量新鮮培養(yǎng)基,將細胞均勻混合后,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中,再放入37°C,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 FTC-133細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-C1細胞、SNU-251細胞、NSC34細胞 DKMG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NR8383.1細胞、ECC 12細胞、Hs821T細胞 D324 Med細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HFL細胞、FHCRC-11細胞、PANC0504細胞 A549/DDP細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2029細胞、SW 948細胞、COLO320 DM細胞 KYSE-150細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BJA-B細胞、74Int細胞、Ly1細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 SVG p12 epithelioid cells人星形膠質(zhì)細胞系 細胞生長特性:貼壁 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 培養(yǎng)細胞真的不難,最關(guān)鍵幾點:1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進口的,真的很難相信你會把細胞養(yǎng)壞;2)動作要快,胰酶消化,換液什么,細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時間,所謂的細胞狀態(tài)差,很多時候是傳代的原因;3)有時間的話,需要細胞計數(shù),傳相應(yīng)數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細胞的生長曲線,不會臨時要處理,手足無措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時間,傳代細胞的實驗穿插進行,可以節(jié)省很多時間,也不會耽誤別人的實驗;5)個人的實驗器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細胞不能進去太多人,避免相互干擾。每天對待細胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細胞時有哪些經(jīng)驗教訓(xùn)可以分享呢?1)嚴格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準備一套;3)有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測;4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟,勤換(滅菌水加進去);5)晚上離開的時候給傳代細胞照紫外,超凈臺是用完就開;6)是同一時間就你一個人在用傳代細胞在養(yǎng)細胞。 Functional Liver Cell-7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OK-WT細胞、BC-3H-1細胞、CAMA1細胞 SGC 7901細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-2932細胞、UK Pan-1細胞、P30/0HK細胞 LK 2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MZ-CRC-1細胞、LADMAC細胞、J774 A1細胞 ROS17/28細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Immortalized Human Hepatocytes細胞、MC57G細胞、IGROV-1細胞 H4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:M1細胞、RPMI-2650細胞、SNU761細胞 2BS細胞系相關(guān)產(chǎn)品:alphaTC1 Clone 6細胞、NCI-H2030細胞、H69細胞 Walker-Ca.256細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tu 177細胞、WSU-DLCL(2)細胞、KNS42細胞 Walker-256細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AR4-IP細胞、HCC0366細胞、HEL-92_1_7細胞 H-446細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U251-MG細胞、Hs 888.T細胞、A9(Hamprecht)細胞 MNNG-HOS細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-LY-3細胞、GB1細胞、TMD-8細胞 SVG p12 epithelioid cells人星形膠質(zhì)細胞系 SMA-560細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MD Anderson-Metastatic Breast-361細胞、801-D細胞、Tu-686細胞 B16/F1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H345細胞、HEK293E細胞、NCIH1648細胞 COLO 741細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H820細胞、hs 68細胞、LA-795細胞 L cell細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C38細胞、CHO-K1細胞、Hep-G2細胞 LCD細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-SNU-520細胞、ISHI細胞、GM12878細胞 YES-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H889細胞、OCI-LY-18細胞、BNL 1MEA.7R.1細胞 YES-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H889細胞、OCI-LY-18細胞、BNL 1MEA.7R.1細胞 EFM-192B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH548細胞、CEK細胞、Hs 578T細胞 Hs 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NIH:OVCAR4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ly8細胞、CHL-1細胞、DK-MG細胞 My-La 2059細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-266 AR1細胞、H345細胞、MIMVEC細胞 COLO320HSR細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2110細胞、SuDHL 4細胞、H2073細胞 RCS細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A375細胞、GM17219細胞、PANC3.27細胞 T24細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KCL22S細胞、GA-10細胞、UCLA-RO 81細胞 SW 900細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H295R-S1細胞、H1563細胞、Tb1.Lu細胞 LA795細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Vero from pool #76細胞、HLF-a細胞、OVCAR-5細胞 TE-7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Human Intestinal Epithelial Cell-6細胞、MGH-UI細胞、H2291細胞 L-WRN細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LC-1細胞、NCIH1836細胞、CW-2細胞 LAN6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE-8細胞、AD-293細胞、U373細胞 Hs-606-T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKES1細胞、NCIH1838細胞、LP-1細胞 LIPF155C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DMS-114細胞、MonoMac6細胞、Mv 1 Lu (NBL-7)細胞 HIT T15細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SuDHL 8細胞、DH82細胞、TCMK-1細胞 HIT T15細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SuDHL 8細胞、DH82細胞、TCMK-1細胞 KYSE 180細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2108細胞、OVCAR-8細胞、SBC-3細胞 CHO K1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL 78細胞、NCIH1623細胞、NCI-H82細胞 KAT-5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2030細胞、NCIH1993細胞、CMT93細胞 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