Alexa Fluor 488/PI細胞凋亡檢測試劑盒

中文名稱：Alexa Fluor 488/PI細胞凋亡檢測試劑盒

英文名稱：Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit

產(chǎn)品規(guī)格：50次

本試劑盒是一種采用Annexin V-Alexa Fluor 488與PI雙染法進行細胞早期凋亡分析的檢測試劑盒。
  細胞凋亡早期改變發(fā)生在細胞膜表面，這些細胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細胞膜外，使PS暴露在細胞膜外表面。PS是一種帶負電荷的磷脂，正常主要存在于細胞膜的內(nèi)面，在細胞發(fā)生凋亡時細胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細胞膜外。Annexin V具有易于結(jié)合到磷脂類如PS的特性，對PS有高度的親和性。因此，該蛋白可充當一敏感的探針檢測暴露在細胞膜表面的PS。PS轉(zhuǎn)移到細胞膜外不是凋亡所獨特的，也可發(fā)生在細胞壞死中。兩種細胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細胞膜是完好的，而細胞壞死在其早期階段細胞膜的完整性就被破壞。另外一種活細胞非透過性熒光染料碘化丙啶不能通過完整的活細胞，但能夠?qū)乃篮偷蛲鐾砥诘募毎M行染色， 因此通常將Annexin V與PI配合染色， 以區(qū)別凋亡早期細胞與壞死細胞和凋亡的晚期細胞。

試劑盒組成：

注意事項：
1、消化細胞時不能用含EDTA的胰酶。
2、本試劑盒需使用流式細胞儀進行檢測。
3、需自備PBS和去離子水。
4、熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
5、PI對人體有刺激性，請注意適當防護。
6、請穿實驗服并戴一次性手套操作。

操作步驟：

1、細胞樣品的準備：
a．對于貼壁細胞：小心收集細胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用胰酶消化細胞，至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時，加入前面收集的細胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細胞，并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞。
b．對于懸浮細胞：1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，并轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細胞。再次加入1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞。

2、用去離子水按1:3稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去離子水)。
3、用 250μl Binding Buffer重新懸浮細胞，調(diào)節(jié)其濃度為 1×106/ml。
4、取 100μl的細胞懸液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V-Alexa Fluor 488 和10μl 20μg/ml的PI溶液。
5、混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘。
6、在反應(yīng)管中加 400μl PBS，流式細胞儀(FACS)分析。

實驗圖例：

Jurkat細胞用順鉑誘導凋亡后用Annexin V-Alexa Fluor 488/PI雙染流式分析圖譜
儲存條件：2～8℃，避光保存

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！