"RKO Cell:人結(jié)腸癌細(xì)胞系 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞生長:貼壁 細(xì)胞背景資料:RKO是一個低分化的結(jié)腸癌細(xì)胞系。RKO細(xì)胞含有野生型P53,但缺乏人甲狀腺受體核受體(h-TRbeta1)。RKO細(xì)胞的P53蛋白的水平高于RKO-E6細(xì)胞。RKO細(xì)胞系是RKO-E6和RKO-AS45-1的親本細(xì)胞系。該細(xì)胞系在裸鼠中成瘤,且在軟瓊脂中形成集落。 CAL 39細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MM1S細(xì)胞、NCI-H1522細(xì)胞、MMAc.SF細(xì)胞 WEHI231細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LICR-HN6細(xì)胞、McA-RH 7777細(xì)胞、VMRC-RCZ細(xì)胞 CNLMG-B5537SKIN細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UPCI:SCC90細(xì)胞、L 540細(xì)胞、SK-N-BE2細(xì)胞 Line 697細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HUT 226細(xì)胞、L-cells細(xì)胞、HeLa-S3細(xì)胞 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 RKO Cell:人結(jié)腸癌細(xì)胞系 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)相關(guān)問題總結(jié):支原體(mycoplasma)污染的細(xì)胞,是否能以肉眼觀察出異狀?不能。除極有經(jīng)驗(yàn)之專家外,大多數(shù)遭受支原體污染的細(xì)胞株,無法以其外觀分辨之;支原體污染會對細(xì)胞培養(yǎng)有何影響?支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞之生長參數(shù),代謝及研究之任一數(shù)據(jù)。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前,必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free,實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義;偵測出細(xì)胞株有支原體污染時,該如何處理?直接滅菌后丟棄,以避免污染其它細(xì)胞株;CO2培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔?定期(至少每兩周一次) 以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之;為何培養(yǎng)基保存于4°C冰箱中,顏色會偏暗紅色,且pH值會越來越偏堿性?培養(yǎng)基保存于4°C冰箱中,培養(yǎng)基內(nèi)之CO2會逐漸溢出,造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenol red)的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果,將造成細(xì)胞生長停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時,可以通入無菌過濾之CO2,以調(diào)整pH值;購買之細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;購買之細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細(xì)胞置于–80°C太久;收到之冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常見問題總結(jié):1)一般客戶拿到細(xì)胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細(xì)胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。收到細(xì)胞時如無異常情況,請?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。細(xì)胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細(xì)胞多久能到,是寄凍存的細(xì)胞還是復(fù)蘇好的細(xì)胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細(xì)胞前請確認(rèn)當(dāng)?shù)販囟龋绻麣鉁氐陀冢炊鹊?,則采用郵寄凍存細(xì)胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細(xì)胞大都無法立即適應(yīng),造成細(xì)胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細(xì)胞無法存活。 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 MCF7-GFP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3/NS-1細(xì)胞、SW 1353細(xì)胞、CCRF-CEM C1細(xì)胞 A2058細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-480細(xì)胞、AMC-HN8細(xì)胞、A7r5細(xì)胞 P3/X63-Ag8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MHCC 97細(xì)胞、MOVAS細(xì)胞、HCC-366細(xì)胞 NR8383.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH520細(xì)胞、COC1/CDDP細(xì)胞、A2058細(xì)胞 SUM-159-PT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Sp2/0-Ag-14細(xì)胞、SW1271細(xì)胞、OVCAR4細(xì)胞 細(xì)胞生長特性:貼壁生長 RKO Cell:人結(jié)腸癌細(xì)胞系 細(xì)胞復(fù)蘇后貼壁細(xì)胞較少的問題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細(xì)胞沒問題??偨Y(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實(shí)際上復(fù)蘇出問題的可能非常小,因?yàn)椴僮骱唵?,而且死板。1、你凍存的時候是不是消化的時間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,太長的消化時間會讓細(xì)胞復(fù)蘇時失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,這個有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個事情,因?yàn)檫@個東西流程長。6、如果你細(xì)胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。7、你的細(xì)胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個概念的,所有在一個孵箱里的細(xì)胞都污染一個細(xì)菌的話,這個細(xì)菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因?yàn)榉跸錈o論你如何處理都有大量的細(xì)菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,不能靠猜,否則你就有可能細(xì)胞養(yǎng)絕最后換課題,這個見得太多了,別不當(dāng)會事。 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮樣 NCI-H87細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:7404細(xì)胞、RH-35細(xì)胞、COLO824細(xì)胞 H2291細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RGC-6細(xì)胞、H841細(xì)胞、HCV-29細(xì)胞 SKGT4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BEND細(xì)胞、HCC15細(xì)胞、CCRF SB細(xì)胞 AAV-293細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P19細(xì)胞、A1847細(xì)胞、HECV細(xì)胞 RL95-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Clone 166細(xì)胞、GM03570細(xì)胞、Molm 13細(xì)胞 H-660細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3X63細(xì)胞、WM266mel細(xì)胞、Y3-Ag123細(xì)胞 H-1882細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IPECJ2細(xì)胞、K7M2細(xì)胞、MIA PaCa-2細(xì)胞 RKO Cell:人結(jié)腸癌細(xì)胞系 TH1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A9(Hamprecht)細(xì)胞、Large Cell Lung Cancer-103H細(xì)胞、SC1細(xì)胞 LNCaP clone FGC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Centre Antoine Lacassagne-51細(xì)胞、H2330細(xì)胞、JKT-1細(xì)胞 MDAPC2B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:M07e細(xì)胞、H2106細(xì)胞、SF539細(xì)胞 Madison細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RF/6A細(xì)胞、SF 126細(xì)胞、CBRH7919細(xì)胞 NCI-H1563細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HO-8910PM細(xì)胞、U87MG細(xì)胞、FHCRC-11細(xì)胞 Neuro-2a細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBSMC細(xì)胞、IOSE80細(xì)胞、Madin Darby Bovine Kidney細(xì)胞 HCEC-B4G12細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AX-Mel細(xì)胞、MNNG細(xì)胞、H-1975細(xì)胞 PANC 1005細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BEP2D細(xì)胞、Psi-2-DAP細(xì)胞、JVM-3細(xì)胞 SMMC 7721細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EBNA293細(xì)胞、NCIH1792細(xì)胞、H2347細(xì)胞 SMMC 7721細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EBNA293細(xì)胞、NCIH1792細(xì)胞、H2347細(xì)胞 NCI-H292細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FC33細(xì)胞、GM04671細(xì)胞、Eca-109細(xì)胞 SNU119細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA1386細(xì)胞、MUTZ-3細(xì)胞、CL1-0細(xì)胞 T47-D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L 1210細(xì)胞、EFM-19細(xì)胞、CAL 33細(xì)胞 HS 445T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA.MB.435細(xì)胞、PK15細(xì)胞、L-cells細(xì)胞 HCC0827細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI-8402細(xì)胞、3 LL細(xì)胞、IBRS-2細(xì)胞 SNU-C2A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AAV293細(xì)胞、SNU-354細(xì)胞、SNU-5細(xì)胞 WILL-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Baby Hamster Kidney from litter No. 21細(xì)胞、BMF細(xì)胞、NCIH2172細(xì)胞 Melan-a細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC15細(xì)胞、HNE1細(xì)胞、HPAF-2細(xì)胞 H35細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OV 2008細(xì)胞、6T-CEM細(xì)胞、OVCAR8細(xì)胞 HT29細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW 962細(xì)胞、OVCA-432細(xì)胞、HCT_116細(xì)胞 A 253細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P31 FUJ細(xì)胞、HFLS-RA細(xì)胞、FOXNY細(xì)胞 LUDLU 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC9204細(xì)胞、CCD841CoTr細(xì)胞、NPC-TW-039細(xì)胞 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