Bradford法蛋白定量試劑盒

產(chǎn)品及特點(diǎn)Bradford 法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度是最為常用的蛋白檢測(cè)方法之一，在酸性條件下， 考馬斯亮藍(lán)（Coomassie G-250）染料能與蛋白質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物，其大吸光 值也由 465 nm 轉(zhuǎn)移到 595 nm，通過(guò)顏色的強(qiáng)弱即可測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的高低。

本 產(chǎn)品是基于 Bradford 法蛋白檢測(cè)原理開(kāi)發(fā)的產(chǎn)品，具備下述特點(diǎn)：

1. 快速，10-20 個(gè)樣品只需要 10 分鐘即可完成測(cè)定。

2. 穩(wěn)定，加樣混勻后 2 分鐘既可測(cè)定，1 小時(shí)內(nèi)吸光度變化不超過(guò) 10%。

3. 線性范圍在 50～1000 μg/mL。

4. 最小測(cè)量體積為 1-20 uL，低測(cè)量蛋白量為 0.5 ug。

5. 即開(kāi)即用，不需要單獨(dú)購(gòu)買(mǎi)每個(gè)成分再配制。

6. 有常規(guī)和微量?jī)煞N檢測(cè)模式。
規(guī)格及成分 成 分 編 號(hào) 小紙盒包裝
溶液 A LM80814a 250 mL（棕色瓶）
BSA 標(biāo)準(zhǔn)（2 mg/mL） LM131070 1 mL
定性濾紙（直徑 12.5cm） LM80814b 50 張
使用手冊(cè) LM80814sc 1 份

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存，BSA 標(biāo)準(zhǔn)需低溫運(yùn)輸、-20℃保存，有效期一年。

自備儀器試劑 超純水、分光光度計(jì)

使用方法

一、制備溶液 A 工作液

1. 將試劑盒提供的溶液 A 與自備的超純水按 1：4 比例充分混合即為溶液 A 工作 液 (例：4 mL 溶液 A + 16 mL 超純水= 20 mL 溶液 A 工作液)。每次配制多 少取決于檢測(cè)方法和測(cè)試體積，需要預(yù)先按下面的手冊(cè)計(jì)算。

2. 用本試劑盒提供的濾紙過(guò)濾溶液 A 工作液。過(guò)濾后的工作液室溫條件下可穩(wěn)定 使用 1-2 星期。注意：不同型號(hào)、規(guī)格的濾紙，具有不同的孔徑，導(dǎo)致可通過(guò) 的分子各不相同。請(qǐng)使用本公司指定提供的濾紙，否則會(huì)導(dǎo)致不同的測(cè)定結(jié)果。

二、制備 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋液

3. 測(cè)試開(kāi)始之前，應(yīng)首先制備 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋液。本試劑盒使用 BSA 作為 標(biāo)準(zhǔn)品。用戶也可以使用自備的其他蛋白質(zhì)濃度測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)品。每個(gè)濃度具體 需要多少體積取決于檢測(cè)方法和測(cè)試體積，需要預(yù)先按下面的手冊(cè)計(jì)算。沒(méi)有 用完的 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋液可以放-20℃待下次使用。

a) 如果進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)，建議用溶解待測(cè)樣品的緩沖液將 BSA（2 mg/mL） 稀釋成下面的 8 個(gè)濃度： 0μg/mL、31.25μg/mL、62.5μg/mL、125μg/mL、250μg/mL、 500μg/mL、750μg/mL、1000μg/mL

b) 如果進(jìn)行微量檢測(cè)，建議用溶解待測(cè)樣品的緩沖液將 BSA（2 mg/mL） 稀釋成下面的 6 個(gè)濃度： 0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、7.5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL

三、常規(guī)檢測(cè)流程

常規(guī)檢測(cè)法在蛋白濃度 30 - 1000 μg/mL 范圍內(nèi)呈現(xiàn) R 2 = 0.996 的直線線 性回歸，可精確定量蛋白濃度在此范圍內(nèi)的蛋白樣品。

4. 在標(biāo)記的離心管中分別加入 N 個(gè)待測(cè)蛋白樣品和 8 個(gè)個(gè) BSA 梯度稀釋液，然后 再在每個(gè)離心管中按 1:50 的比例加入溶液 A 工作液。終體積多少取決于比色 杯的體積。 如果用 3 mL 比色杯檢測(cè)，則取 100 μL 樣品+5 mL 溶液 A 工作液； 如果用 1 mL 比色杯檢測(cè)，則取 40 μL 樣品+2mL 溶液 A 工作液； 如果用平底透明 96 孔板，則取 20 μL 樣品+1 mL 溶液 A 工作液。

5. 樣品與溶液 A 工作液混合后，充分震蕩 30 秒混勻。

6. 室溫放置 5 分鐘。

7. 分光光度計(jì)檢測(cè)吸光度。波長(zhǎng)設(shè)定= 595nm。用 96 孔板測(cè)定時(shí)，應(yīng)確保沒(méi)有 氣泡，否則氣泡會(huì)對(duì)增加吸光度的讀數(shù)。

8. 將待測(cè)樣品的測(cè)定值逐一跟用 BSA 梯度稀釋液測(cè)定值繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較得 到待測(cè)樣品的蛋白質(zhì)濃度。

四、微量檢測(cè)流程

此方法在蛋白濃度 1～20 μg/mL 范圍內(nèi)呈現(xiàn) R 2 = 0.992 的直線線性回歸， 可精確定量蛋白濃度在此范圍內(nèi)的蛋白樣品。再在每個(gè)離心管中按 4:1 的比例（注意：不是 1:50）加入溶液 A 工作液。終 體積多少取決于比色杯的體積。 如果用 3 mL 比色杯檢測(cè)，則取 4 mL 樣品+1 mL 溶液 A 工作液； 如果用 1 mL 比色杯檢測(cè)，則取 2 mL 樣品+0.5 mL 溶液 A 工作液； 如果用平底透明 96 孔板，則取 400 μL 樣品+100 μL 溶液 A 工作液。

10. 樣品與溶液 A 工作液混合后，充分震蕩 30 秒混勻。

11. 室溫放置 5 分鐘。

12. 分光光度計(jì)檢測(cè)吸光度。波長(zhǎng)設(shè)定= 595nm。用 96 孔板測(cè)定時(shí)，應(yīng)確保沒(méi)有 氣泡，否則氣泡會(huì)對(duì)增加吸光度的讀數(shù)。

13. 將待測(cè)樣品的測(cè)定值逐一跟用 BSA 梯度稀釋液測(cè)定值繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較得 到待測(cè)樣品的蛋白質(zhì)濃度。