超敏型BCA法蛋白定量試劑盒
產品及特點本產品是在 BCA 法蛋白定量試劑盒（CAT#:80815-500）基礎上改進的超敏蛋白定量試劑盒，尤其適合對低濃度的蛋白質溶液進行定量分析。它具有下列特點。

1. 超敏感，最低檢測濃度為 0.5µg/mL。

2. 線性范圍在 0.5～20µg/mL，尤其適用于低濃度的樣品。

3. 對大多數離子型和非離子型去污劑不敏感，但對 Cu 的還原劑和螯合劑敏感。

4. 比 Lowry 法更加簡單快捷，45 分鐘內完成測定。

5. 試劑穩(wěn)定，但工作液 1 天內有效。

6. 終產物穩(wěn)定，檢測不同蛋白質分子的變異系數遠小于考馬斯亮藍法蛋白定量。

7. 最短可以檢測雙肽，所以適合于分子量較小的蛋白質，而 Bradford 法需要一定大小的蛋白質。

超敏型BCA法蛋白定量試劑盒運輸及保存 常溫運輸和保存，但 BSA 標準品需要低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑 樣品緩沖液 

使用方法

1. 用合適的方法制備待測蛋白樣品，并把蛋白質溶解在合適的樣品緩沖液中。本檢測方法受待測樣品中螯合劑和還原劑的影響，所以需確保蛋白溶液中，EDTA 的終濃度不高于 10mM、二硫蘇糖醇不高于 1mM、β-巰基乙醇不高于 1mM，沒有任何 EGTA。如果達不達上述要求，則需要稀釋樣品，使其濃度降低到上述濃度之下。

2. 將本試劑盒提供的 BSA 標準品（2 mg/溶液 C 混合即可，所得溶液即超敏 BCA 工作液。4. 取一塊 96 孔板，按下表加入上步新鮮制備的 BSA 工作液、待測蛋白樣品和自備樣品緩沖液：編號 BSA 工作液

（µL）待測樣品（µL）樣品緩沖液（µL）總體積（µL）蛋白含量（µg）0 0 0 150 150 01 5 0 145 150 0.22 10 0 140 150 0.43 20 0 130 150 0.84 40 0 110 150 1.65 60 0 90 150 2.46 80 0 70 150 3.27 100 0 50 150 4.0N 個待測樣品 0 ？µL 補到 150 150 待測

5. 在每個孔中加入 1 倍體積（即 150 µL）的超敏 BCA 工作液并混勻。如果用排槍加入并混勻則更好。也可把 96 孔板放在振蕩器上振蕩 30 秒混勻。6. 60℃放置 1 小時。

7. 冷至室溫，迅速在 562 nm 下比色測定其余樣品的光吸收。如酶標儀沒有562 nm 的設定，可用接近的波長檢測，如 570nm。測定操作在 10 分鐘內完成，否則化學反應還在繼續(xù)進行，光吸收值每 10 分鐘會升高 2.5%左右。

8. 處理數據：將編號為 0 號的樣品（對照）的讀數從其余所有樣品（包括 0 號樣品，其讀數變成零）中扣除。

9. 制作標準曲線：以 0-7 號樣品的 BSA 含量（單位 µg，見上表最右行）為橫坐標，以上一步得到的樣品吸光值（扣除背景讀數的）為縱坐標，繪出 BSA的標準曲線。

10. 再將 N 個待測樣品的吸光值（減去 0 號樣品的讀數后）標在標準曲線上，其在橫坐標上對應的蛋白含量（µg）就是待測樣品中的蛋白質含量，除以樣品稀釋液總體積（20µL），乘以樣品稀釋倍數即為樣品實際濃度（單位：µg/µL）。
二：注意事項

11. 加工作液后也可以在室溫放置 2 小時，或 60℃放置 30 分鐘。超敏 BCA 法測定蛋白濃度時，吸光度會隨著時間的延長不斷加深。并且顯色反應會因溫度升高而加快。所以，如果蛋白質濃度較低，可以改在 60℃孵育 60 分鐘。
12. 待測樣品濃度在 20～2000 µg/mL 范圍時有較好的線性關系。

13. 超敏 BCA 法測定蛋白濃度時，不受下列化學物質的影響：名稱 濃度小于下面數值時不受影響

Ammonium S µLfate 1.5 MBrij-35 5.0%CHAPS 5.0%EDTA 10 mMHepes 100 mMGlycine, pH 2.8 100 mM

Guanidine HCl 4.0 MTween 20、60、80 5.0%SDS 5.0%Sodium Acetate pH 5.5 20 mMSodium Chloride (NaCl) 1.0 MSucrose 40%Sodium Hydroxide (NaOH) 0.1 MNP-40 5.0%Triton X-100 5.0%Urea 3.0 M本試劑受溫度和時間影響較大，故需要準確定時和定溫，以保證精確定量。