柱式血清/血漿游離DNAout(cfDNA) 產(chǎn)品及特點(diǎn) 本產(chǎn)品是基于離心柱層析法,用于從血漿/血清中方便、快速、可靠地提取游離 循環(huán) DNA(circulating DNA、cell-free DNA,cfDNA)。本產(chǎn)品可用于從新鮮或冷 凍血漿/血清樣品中分離各種大小的 cfDNA,它具有下列特點(diǎn): 1. 操作簡(jiǎn)單,整個(gè)過(guò)程只需要 20 分鐘左右。 2. 不需要額外在洗柱液中補(bǔ)加乙醇。 3. 安全無(wú)毒,不需要使用苯酚和氯仿等有機(jī)溶液。 4. 與 PCR 和熒光 PCR 兼容。 5. 可在 30 μL~100 μL 范圍內(nèi)靈活調(diào)節(jié)洗脫體積濃縮循環(huán) DNA。 6. 適用于各種血清和血漿。 柱式血清/血漿游離DNAout(cfDNA)運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸及保存,柱式血清/血漿游離 DNA 溶液 A 長(zhǎng)期(1 月以上)放置時(shí)需要放 4℃。 有效期一年。 自備試劑 無(wú),但需要自備 RNase-free 的 1.5 mL 離心管(耗材)。 柱式血清/血漿游離DNAout(cfDNA) 使用方法 1. 如果有 N 個(gè)樣品,標(biāo)記 N+2 個(gè) 1.5-2 mL 螺旋蓋塑料離心管(如 Sarstedt CAT#:782.694.006),多出的一個(gè)為陽(yáng)性對(duì)照(PC),一個(gè)為陰性對(duì)照(NC)。 為避免污染,建議不要使用壓蓋式塑料離心管。在每個(gè)管上做個(gè)標(biāo)記,以在后續(xù) 操作時(shí)區(qū)別向心面和離心面。然后在離心管中分別加入 0.2 mL 血清或血漿,在 PC 管中加入已經(jīng)確認(rèn)有陽(yáng)性 DNA 的血清或血漿,在 NC 管中加入已經(jīng)確認(rèn)沒(méi)有 陽(yáng)性 DNA 的血清或血漿。 2. 加入 0.6 mL 柱式血清/血漿游離 DNA 到各離心管中,振蕩 30 秒混勻后室溫放 置 10 分鐘。注意:柱式血清/血漿游離 DNA 溶液 A 在 4℃放置后可能會(huì)產(chǎn)生結(jié) 晶,使用前必須放在 65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。 3. 加入 0.8mL 上柱結(jié)合液到離心管中,顛倒混勻后轉(zhuǎn)移一半的混合液(0.8mL) 到離心吸附柱中,室溫放置 2 分鐘。 4. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘,棄收集管中的穿透液,把離心吸附柱放回到收集 管中。 5. 將剩余的另外一半裂解液(0.8mL)轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,室溫放置 2 分鐘。 6. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘,棄收集管中的穿透液,把離心吸附柱放回到收集 管中。 7. 加入 0.7 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中,12,000 rmp 室溫離心 1 分鐘,棄收 集管中的穿透液,把離心吸附柱放回到收集管中。 8. 加入 0.3 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中,12,000 rmp 室溫離心 1 分鐘,棄收 集管中的穿透液,把離心吸附柱放回到收集管中。此為第二次洗滌,可以跳過(guò)。 9. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘(干甩),棄含穿透液的離心管。 10. 將干甩后的離心吸附柱套入到一個(gè)自備的 1.5 mL 離心管中,在離心吸附柱的濾 膜的中部加入 30uL DNA 洗脫液 3.0,然后室溫放置 2 分鐘。 11. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘,離心管中的溶液即為游離 DNA 溶液。 12. DNA 樣品可以直接用于 PCR,也可放-20℃長(zhǎng)期保存。
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