??????碧云天的Human IL-4 ELISA Kit (Human Interleukin-4 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人白細胞介素4酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的IL-4的ELISA試劑盒。
??????本產品檢測靈敏度高，特異性強，重復性好。多次重復檢測結果表明，最小檢出量為7.8pg/ml，與人IL-4 Sr，小鼠IL-4等均沒有交叉反應，板內、板間變異系數(shù)均小于10%。
??????IL-4即白細胞介素-4(簡稱白介4)，是一種多功能細胞因子，主要由活化的T淋巴細胞、肥大細胞和嗜堿性粒細胞產生。IL-4因為糖基化的不同，分子量從15-19kDa不等。在不同類型的細胞中，IL-4參與調節(jié)多種細胞的免疫應答功能。IL-4參與B細胞的激活過程，它能誘導處于靜息期的B細胞上Ⅱ型MHC(主要組織相容復合體)分子的表達，增強IgE與IgG的表達和分泌，還能調節(jié)淋巴細胞和單核細胞上對IgE低親和FC受體的表達。IL-4也是前體輔助T細胞向Th2細胞分化的重要調節(jié)因子。此外，IL-4在體內外均表現(xiàn)出了一定的抗腫瘤活性，IL-4在機體中的遺傳變異可導致缺血性中風，腦血管意外或腦梗塞等疾病。
??????人IL-4前體蛋白(包含153個氨基酸)剪切掉24個氨基酸的信號肽后得到成熟的人IL-4。成熟的人IL-4與小鼠IL-4具有50%的氨基酸同源性，兩個物種的IL-4不存在交叉反應性。同時人IL-4與人IL-13具有大約30%的氨基酸同源性，并且具有部分重疊的生物學活性。
??????特定細胞表面的受體復合物參與調節(jié)IL-4生物學功能。IL-4的受體主要有兩種類型，種類型的IL-4功能受體復合物由IL-4結合亞基(IL-4 R)和特定的γ_c鏈組成，該γ_c鏈同時也是IL-2,IL-7,IL-9和IL-15受體復合物的組成部分。第二種類型的IL-4功能受體復合物是由IL-4 R和IL-13 Rα組成，盡管IL-4 R并不直接與IL-13結合，但當其與IL-13 R α形成復合物后，該復合物同時也對IL-13具有很高的親和力。此外，除了細胞膜表面的IL-4受體，在人及小鼠的體液和小鼠細胞培養(yǎng)上清液中均檢測到了游離IL-4受體的存在。
??????IL-4先與IL-4 Rα結合形成IL-4/IL-4 Rα復合物，該復合物隨后再與輔助受體鏈γ_c或IL-13 R 結合。當IL-4與受體結合后，依靠胰島素受體底物IRS2和Shc蛋白激活Ras/MEK/Erk通路，實現(xiàn)促進細胞有絲分裂的作用。此外，IL-4與IL-4 Rα的結合還能夠誘導JAK及STAT的磷酸化，磷酸化后的STAT形成二聚體進入細胞核，對靶基因的表達進行調控，同時磷酸化后的JAK還能夠實現(xiàn)對PL3K/AKT通路的激活。
??????本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中人IL-4的濃度，其原理見圖1。人IL-4特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的人IL-4會與捕獲抗體結合。當加入生物素化的抗人IL-4抗體后，生物素化抗人IL-4抗體與人IL-4結合，形成夾心的免疫復合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。人IL-4濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中人IL-4濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。

??????一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：

保存條件：
??????除標準品外，4℃保存6個月內有效。標準品4℃保存，1-2周內有效，-20℃保存6個月內有效。
注意事項：
??????由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
??????洗滌液(20X)在低溫下可能有結晶，如果發(fā)現(xiàn)有結晶，請室溫水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。
??????為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
??????TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
??????加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
??????不宜混用不同批號的試劑盒組份，每批次試劑盒均經過獨立測試。
??????充分混勻對保證反應結果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
??????本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致最終檢測到的吸光度顯著下降。
??????洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。
??????檢測標準品和樣品時建議設置重復孔，以確保檢測結果的可信度。
??????加樣過程中須避免氣泡的產生。
??????本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
??????為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。