脂多糖,英文名稱Lipopolysaccharides,簡稱LPS,是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁中的一種特有成分,位于細(xì)胞壁的最外層并暴露于非莢膜細(xì)菌的細(xì)胞表面,有利于維持細(xì)胞外膜的完整性,保護(hù)細(xì)菌免受膽汁鹽和脂類抗生素的破壞。結(jié)構(gòu)上,脂多糖由類脂A、核心多糖和O-多糖側(cè)鏈組成。其中類脂質(zhì)A是構(gòu)成細(xì)菌內(nèi)毒素的主要成分,決定其毒性強(qiáng)弱;而O-多糖側(cè)鏈在不同細(xì)菌間是高度變化的,特異性決定細(xì)菌的血清型。LPS可以引起免疫刺激的級聯(lián)反應(yīng)和機(jī)體的毒性病理生理活動,包括釋放內(nèi)毒素引起感染性休克從而導(dǎo)致末梢血管虛脫。臨床常通過檢測LPS的存在來診斷腦膜炎。正是LPS與機(jī)體免疫機(jī)能的密切關(guān)系,生命科學(xué)研究常常提取LPS進(jìn)行相關(guān)的研究,如闡明LPS的結(jié)構(gòu),代謝,免疫學(xué),生理學(xué),毒性,生物合成途徑;誘導(dǎo)生長促進(jìn)因子如白介素的合成與分泌;誘導(dǎo)疾病研究的動物模型如炎癥反應(yīng),急性肺損傷。將LPS分別與FITC、TRITC或2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid (TNBSA)反應(yīng)即可得到FITC、TRITC或TNP標(biāo)記的LPS,主要用于非胸腺依賴性B細(xì)胞對細(xì)菌LPS的免疫應(yīng)答研究。。LPS可通過TCA、酚、酚-氯仿-石油醚等方法制備,其中最后一種方法為粗提取法。TCA和酚提取得到的LPS在結(jié)構(gòu)上、電泳圖譜和內(nèi)毒素水平均較相似,不同之處在于含有的核酸和蛋白質(zhì)殘留量不同,TCA法得到的LPS含有約2%的RNA和10%的變性蛋白。酚法提取的LPS含有達(dá)60%的RNA和少于1%的蛋白。用凝膠過濾層析可除去酚提取LPS中的殘留蛋白,但是仍會留下約10-20%的核酸。進(jìn)一步用離子交換層析法純化可得到<1%蛋白和<1%RNA的LPS。
本品來源于血清型大腸桿菌O55:B5,用苯法提取而得。其內(nèi)毒素水平不少于500,000 EU (endotoxin units)/mg,經(jīng)分析,1ng相當(dāng)于0.5EU(鱟試劑法)和10EU(顯色法)。LPS O55:B5可用于刺激人腹腔巨噬細(xì)胞(1ng/ml)以及馬腹腔巨噬細(xì)胞的活動(1-100ng/ml)。
來源:Escherichia coli 055:B5
溶解性:可溶于水(10mg/ml)或細(xì)胞培養(yǎng)基(1mg/ml),產(chǎn)生渾濁淡黃色溶液,溶于鹽溶液經(jīng)旋渦振蕩并加熱到70-80℃可得到一種濃度更高的LPS溶液(20mg/ml)。
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