一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量測定試劑盒說明書
微量法 100管/96樣
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
NO（Nitric Oxide，NO）廣泛分布于生物體內(nèi)神經(jīng)、循環(huán)、呼吸、消化、泌尿生殖等系統(tǒng)中，特別是神經(jīng)組織中較豐富。它作為細(xì)胞間及細(xì)胞內(nèi)的信息物質(zhì)，發(fā)揮信號傳遞的作用，是一種新型的生物信使分子，在機(jī)體的生理、病理過程中起著重要的作用。
測定原理：
NO在體內(nèi)或水溶液中極易氧化生成NO2—，在酸性條件下，NO2—與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物，進(jìn)一步與萘基乙烯基二胺偶合，產(chǎn)物在550nm處有特征吸收峰，測定其吸光值，可以計算NO含量。
組成：
產(chǎn)品名稱 | SG004-100T/96S | Storage |
提取液：液體 | 100ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 6ml | 4℃避光 |
試劑二：液體 | 6ml | 4℃避光 |
說明書 | 一份 |
試劑二：液體6ml×1瓶，4℃避光保存。(用之前60℃加熱震蕩15min)
自備儀器和用品：
天平、研缽或勻漿器、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
樣品處理：
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。10000g，4℃離心15min，取上清，置冰上待測。
細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心15min，取上清置于冰上待測。
體液和培養(yǎng)液等其它液態(tài)樣品：直接測定。
測定步驟和操作表：
分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至550nm。
操作表
| 空白管 | 測定管 |
樣品（μl） |
| 100 |
提取液（μl） | 100 |
|
試劑一（μl） | 50 | 50 |
試劑二（μl） | 50 | 50 |
混勻，室溫靜置15min，于微量石英比色皿/96孔板，測定A550，ΔA=A測定-A空白 |
NO含量計算：
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y= 0.016x -0.0103，R2= 0. 9986
1、組織樣品：
（1）按樣本質(zhì)量計算
NO含量（μmol/g 鮮重）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣÷V樣總×W）×10-3
= 0.125×（ΔA +0.0103）÷W
（2）按樣本蛋白濃度計算
NO含量（μmol/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣×Cpr）×10-3
= 0.125×（ΔA +0.0103）÷Cpr
2、細(xì)胞：
NO含量（μmol/104 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量）×10-3
= 0.125×（ΔA +0.0103）÷細(xì)胞數(shù)量（萬個）
3、其他樣品：
NO含量（μmol/L）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷V樣
= 125×（ΔA +0.0103）
V反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.1ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/ml
用96孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y= 0.008x - 0.0103，R2= 0. 9986
1、組織樣品：
（1）按樣本重量計算
NO含量（μmol/g 鮮重）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反總÷（V樣÷V樣總×W）×10-3
= 0.25×（ΔA +0.0103）÷W
（2）按樣本蛋白濃度計算
NO含量（μmol/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反總÷（V樣×Cpr）×10-3
= 0.25×（ΔA +0.0103）÷ Cpr
2、細(xì)胞：
NO含量（μmol/104 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量）×10-3
= 0.25×（ΔA +0.0103）÷細(xì)胞數(shù)量（萬個）
其他樣品：
NO含量（μmol/L）=（ΔA +0.0103）÷0.008× V反總÷V樣= 250×（ΔA +0.0103）
V反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.1ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/ml
溫馨提示：本產(chǎn)品不可用于臨床用途，詳詢客服。
關(guān)鍵字： 一氧化氮含量檢測;
伊勢久（江蘇連云港）生物科技有限責(zé)任公司，成立于2019年，坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦，主要從事生化檢測、病理檢測和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運行，其中包括150平米的超十萬級的潔凈車間。我司堅持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品，熱銷市場以來收到了客戶的廣泛好評。
公司秉承“ 摯誠科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念，聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新，努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅持以客戶為中心，致力于為中國的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專業(yè)服務(wù)，始終是我們努力的目標(biāo)和方向。