丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量試劑盒說明書 

分光光度法 

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義： 

氧自由基作用于脂質(zhì)的不飽和脂肪酸，生成過氧化脂質(zhì)；后者逐漸分解為一系列復(fù)雜的化合物，其中 包括 MDA。通過檢測(cè) MDA 的水平即可檢測(cè)脂質(zhì)氧化的水平。

測(cè)定原理：

MDA 與硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)縮合，生成紅色產(chǎn)物，在 532nm 有最大吸收峰，進(jìn)行 比色后可估測(cè)樣品中過氧化脂質(zhì)的含量；同時(shí)測(cè)定 600nm 下的吸光度，利用 532nm 與 600nm 下的吸光度 的差值計(jì)算 MDA 的含量。

注意事項(xiàng)： 臨用前注意試劑一是否完全溶解，如未溶解，可以 70℃-90℃加熱，并振蕩以促進(jìn)溶解。

需自備儀器和用品：

可見分光光度、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1ml 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

MDA 提取：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10 4個(gè)）： 提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或 細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰 上待測(cè)。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提 取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

血清（漿）樣品：按照血清（漿）：提取液體積(ml)為 1：1 的比例，充分混合。8000g 4℃離心 10min， 取上清，置冰上待測(cè)。 

測(cè)定步驟：

1、吸取 0.5ml 試劑一于 2ml 離心管中，再加入 0.5ml 樣本, 混勻。 

2、95℃水浴中保溫 30min（蓋緊，防止水分散失），置于冰浴中冷卻，10000g，25℃，離心 10min。 

3、吸取 1ml 上清液于 1ml 玻璃比色皿中，測(cè)定 532nm 和 600nm 處的吸光度，記為 A532 和 A600， ΔA= A532-A600。