單克隆抗體制備（免疫小鼠或兔）服務(wù)內(nèi)容

一、參數(shù)信息

     免疫動(dòng)物與規(guī)模

1.               小鼠：常用 BALB/c（6-8 周齡雌性，4-6 只）、C57BL/6，支持基因工程小鼠（需客戶提供）

2.               家兔：新西蘭白兔（2-3kg 雌性，1-2 只），適用于高親和力抗體篩選

3.               融合細(xì)胞系：小鼠來源 SP2/0 或 NS0 細(xì)胞（支原體檢測(cè)陰性），兔源融合需定制化技術(shù)平臺(tái)

抗原要求

1.               重組蛋白：純度≥90%（提供 HPLC 驗(yàn)證），推薦用量 100-200μg / 小鼠、1-2mg / 兔

2.               合成多肽：需偶聯(lián) KLH/BSA（默認(rèn)提供抗原設(shè)計(jì)與偶聯(lián)），含 1-2 個(gè)獨(dú)特表位（避開同源序列）

3.               特殊抗原：細(xì)胞裂解物 / 病毒樣顆粒（需生物安全二級(jí)以上操作，加收 20% 處理費(fèi)）

   技術(shù)參數(shù)

1.               篩選方法：ELISA 初篩（效價(jià)≥1:50,000）+ 免疫印跡（WB）驗(yàn)證特異性

2.               克隆化：有限稀釋法（≥3 輪）或流式細(xì)胞單細(xì)胞分選（保證單克隆源性＞99%）

3.               抗體形式：

1.               培養(yǎng)上清（體積≥50mL，抗體濃度≥50μg/mL）

2.               小鼠腹水（體積≥5mL，濃度≥5mg/mL，需提前注射 Pristane 佐劑）

3.               純化抗體（Protein A/G 親和層析，純度≥95%，可選 IgG 亞型純化）

   服務(wù)周期

1.               小鼠：8-12 周（免疫 4-6 周 + 融合篩選 4-6 周）

2.               家兔：12-16 周（免疫 6-8 周 + 兔源雜交瘤建系周期延長(zhǎng)）

3.               加急服務(wù)：縮短至 6-8 周（限小鼠，加收 50% 加急費(fèi)）

二、使用信息

   服務(wù)流程

1.               免疫階段：按定制方案進(jìn)行 3-4 次基礎(chǔ)免疫（佐劑可選弗氏 / 鋁佐劑），末次免疫后 3-5 天取脾 / 淋巴結(jié)細(xì)胞

2.               細(xì)胞融合：脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞按 5:1 比例融合，HAT 培養(yǎng)基篩選 7-10 天，獲得雜交瘤克隆

3.               篩選鑒定：① 多孔板初篩（ELISA 檢測(cè)陽(yáng)性孔）② 亞克隆化（有限稀釋法確保單克隆性）③ 功能驗(yàn)證（WB/IHC/FCM 檢測(cè)抗體活性）

4.               產(chǎn)物交付：提供雜交瘤細(xì)胞株（凍存管≥3 支）、抗體樣本及完整報(bào)告（含表位分析、亞型鑒定、親和力常數(shù)）

  適用場(chǎng)景

1.               高特異性抗體開發(fā)（適用于免疫組化、流式細(xì)胞術(shù)、抗體藥物研發(fā)）

2.               稀有抗原檢測(cè)（單克隆抗體低交叉反應(yīng)特性）

3.               診斷試劑盒原料制備（需提供抗體亞型及純化工藝參數(shù)）

   客戶需提供材料

1.               抗原樣本（序列信息、濃度、保存條件，多肽需明確表位氨基酸序列）

2.               免疫動(dòng)物選擇及特殊要求（如無血清培養(yǎng)、人源化抗體初步篩選）

3.               目標(biāo)抗體應(yīng)用場(chǎng)景（功能驗(yàn)證方向需提前溝通）

三、注意事項(xiàng)

   實(shí)驗(yàn)前

1.               抗原需通過內(nèi)毒素檢測(cè)（＜5EU/mg），高內(nèi)毒素可能導(dǎo)致融合效率下降

2.               小鼠免疫前建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)（預(yù)評(píng)估抗原免疫原性，降低項(xiàng)目風(fēng)險(xiǎn)）

  實(shí)驗(yàn)中

1.               融合效率受免疫效果影響，若初篩陽(yáng)性孔＜5%，可免費(fèi)重啟一次融合（限同批次抗原）

2.               兔源單克隆需額外 3-4 周進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞適應(yīng)性培養(yǎng)，周期可能延長(zhǎng)

   實(shí)驗(yàn)后

1.               雜交瘤細(xì)胞株需液氮保存，復(fù)蘇存活率保證≥80%（提供復(fù)蘇檢測(cè)報(bào)告）

2.               腹水樣本需添加 0.02% 疊氮鈉防腐，-80℃分裝保存（避免反復(fù)凍融導(dǎo)致抗體降解）

   質(zhì)量與合規(guī)

1.               提供抗體親和力檢測(cè)（SPR/BLI 法，可選 KD 值測(cè)定，加收 15% 服務(wù)費(fèi)）

2.               實(shí)驗(yàn)動(dòng)物操作符合 GLP 規(guī)范，可提供 AAALAC 認(rèn)證資質(zhì)及倫理審查文件（如需）

3.               嚴(yán)格保密客戶抗原序列及細(xì)胞株信息，數(shù)據(jù)默認(rèn)保存 1 年（可申請(qǐng)長(zhǎng)期托管）