總膽固醇(total cholesterol,TC)含量測(cè)定試劑盒說明書
微量法 100T/96S
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
TC包括游離膽固醇和膽固醇酯。TC是指組織中所有脂蛋白所含膽固醇之總和。
測(cè)定原理:
利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇(FC)和游離脂肪酸(FFA),從而把膽固醇酯轉(zhuǎn)化為FC;進(jìn)一步利用膽固醇氧化酶催化FC氧化,生成△4-膽甾烯酮和H2O2;最后利用過氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚,生成紅色醌類化合物;在500nm有特征吸收峰,其顏色深淺與TC含量成正比。
組成:
產(chǎn)品名稱 | FA022-100T/96S | Storage |
試劑一:異丙醇(自備) | 100ml | -- |
試劑二:液體 | 20ml | 4℃ |
試劑三:粉劑 | 1瓶 | 4℃ |
試劑四:液體 | 40μl | 4℃ |
TC標(biāo)準(zhǔn)品:液體 | 1ml | 4℃ |
說明書 | 一份 |
TC標(biāo)準(zhǔn)品:液體1ml×1支,0.5μmol/ml,4℃保存。
自備儀器和用品:
水浴鍋、可調(diào)式移液槍、酶標(biāo)儀、96孔板。
TC的提?。?/span>
1、組織中TC的提取:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿,8000xg 4℃離心10min,取上清,即TC待測(cè)液。
2、細(xì)胞、細(xì)菌中TC的提?。合仁占?00-500萬細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,加1ml試劑一,超聲波破碎1min(強(qiáng)度20%,超聲2s,停1s),即TC待測(cè)液。
3、血清(漿)等樣品:直接測(cè)定。
測(cè)定操作:
1. /酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到500 nm。
2. TC工作液的配制:臨用前,吸取約0.8ml試劑二分別加入試劑三和試劑四瓶中,充分溶解后再全部轉(zhuǎn)移回試劑二瓶中,充分混勻,TC工作液置于37℃水浴10min。用不完的工作液4℃保存一周。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管:依次在96孔板中加入20μl TC標(biāo)準(zhǔn)液和180μl TC工作液,混勻,37℃靜置3h后于500nm測(cè)定A標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 測(cè)定管:依次在96孔板中加入20μl TC待測(cè)液和180μlTC工作液,混勻,37℃靜置3h后于500nm測(cè)定A測(cè)定管。
5. 空白管:依次在96孔板中加入20μl 試劑一和180μlTC工作液,混勻,37℃靜置3h后于500nm測(cè)定A測(cè)定管。
注意:標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測(cè)定一次。
計(jì)算公式:
1. 血清(漿)中TC含量計(jì)算:
TC(μ mol /dL)=C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×100
=50×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
C標(biāo)準(zhǔn)液:0.5μmol/ml;100 ml:1dL=100 ml。
2. 組織中TC含量計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
TC(μ mol / mg prot)= C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷Cpr
= 0.5×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷Cpr
(2)按樣本質(zhì)量計(jì)算
TC(μ mol / g 鮮重)= C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷W
= 0.5×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷W
C標(biāo)準(zhǔn)液:0.5μmol/ml;樣本蛋白濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g/ml
3. 細(xì)胞、細(xì)菌中TC含量計(jì)算:
TC(μ mol /104 cell)=C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷細(xì)菌或細(xì)胞(104 cell /L)=0.5×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷細(xì)菌或細(xì)胞(104 cell /L)
TC標(biāo)準(zhǔn)液:0.5μmol/ml。
最低檢出限為1nmol/ml。
關(guān)鍵字: 總膽固醇含量測(cè)定試劑盒(微量法100T;
伊勢(shì)久(江蘇連云港)生物科技有限責(zé)任公司,成立于2019年,坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦,主要從事生化檢測(cè)、病理檢測(cè)和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運(yùn)行,其中包括150平米的超十萬級(jí)的潔凈車間。我司堅(jiān)持以自主研發(fā)為核心,現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運(yùn)核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品,熱銷市場(chǎng)以來收到了客戶的廣泛好評(píng)。
公司秉承“ 摯誠科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念,聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新,努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅(jiān)持以客戶為中心,致力于為中國的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專業(yè)服務(wù),始終是我們努力的目標(biāo)和方向。